[发明专利]一种表达谷氨酸脱羧酶的无抗生素抗性重组枯草芽孢杆菌的构建及发酵方法在审
| 申请号： | 201710193236.5 | 申请日： | 2017-03-28 |
| 公开（公告）号： | CN106967659A | 公开（公告）日： | 2017-07-21 |
| 发明（设计）人： | 江波;沐万孟;丁汪洋;张涛 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/61;C12N9/88;C12N15/75;C12P13/00;C12R1/125 |
| 代理公司： | 无锡市大为专利商标事务所(普通合伙)32104 | 代理人： | 时旭丹,张仕婷 |
| 地址： | 214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种表达谷氨酸脱羧酶的无抗生素抗性重组枯草芽孢杆菌的构建及发酵方法，属于生物工程技术领域。以枯草芽孢杆菌WB600为出发菌株，敲除其染色体上D‑丙氨酸消旋酶基因(dal)得到D‑丙氨酸缺陷型WB600(dal‑)；采用重叠延伸PCR技术将优化后的gad基因与无抗生素抗性表达载体pUB110（其抗生素抗性基因被D‑丙氨酸消旋酶基因所代替）融合得到多聚物，再将多聚物转化进枯草芽孢杆菌WB600(dal‑)的感受态中，多聚物在宿主中重组,得到重组质粒pUB‑HpaII‑P43‑gad‑dal，命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）SK44.001，保藏编号CCTCC NOM 2016774。其发酵液酶活可达8.6U/mL，具有重要的工业应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 表达 谷氨酸 脱羧酶 抗生素 抗性 重组 枯草 芽孢 杆菌 构建 发酵 方法 | ||
【主权项】：
一株表达谷氨酸脱羧酶的无抗生素抗性重组枯草芽孢杆菌，其分类命名为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）SK44.001，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M 2016774，其为将重组质粒pUB‑HpaII‑P43‑gad‑dal导入宿主细胞WB600(dal‑)而得到，其组成为WB600/pUB‑HpaII‑P43‑gad‑dal，其能够合成氨基酸序列SEQ ID No.1的谷氨酸脱羧酶。
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