[发明专利]一种天山堇菜中生物碱类化合物及其制备方法

摘要

本发明涉及一种天山堇菜中生物碱类化合物及其制备方法；分离得到的10个化合物为生物碱化合物（类型包括喹啉类、异喹啉类以及二聚哌啶类）；该方法采用甲醇溶剂对天山堇菜全草进行提取，通过酸溶碱沉法制得总生物碱，总生物碱利用两相溶剂分配法进行分配得到上相（有机相）部位，上相部位再利用葡聚糖凝胶色谱法以及正反相色谱法分离得到10个生物碱类化合物。

主权项

1.一种天山堇菜中生物碱类化合物的制备方法，其特征在于该化合物的结构式为：其中：化合物3名称为4‑(2‑羟基‑2‑甲基丙基)‑3‑亚氨基‑2,2,5,7,7,8a‑六甲基‑2,3,6,7,8a,9‑六氢‑8H‑环戊二烯并[2‑b:3,4‑c']二吡啶‑8‑酮；化合物4名称为：8a‑羟基‑2,2,3a,6,6,8‑六甲基‑9‑亚甲基‑1,2,3a,5,6,8a,9,9a‑八氢‑3H‑吡咯并[3,2‑g]异喹啉‑3‑酮；化合物5名称为：(Z)‑6‑(2‑羟基‑2‑甲基亚丙基)‑7‑亚氨基‑1,3,3,4a,8‑五甲基‑4a,5,6,7‑四氢异喹啉‑4(3H)‑酮；化合物6名称为：1,3,3,6,8,8‑六甲基‑3,8‑二氢吡啶并[3,4‑g]异喹啉‑4,9‑二酮；化合物7名称为：1,3,3,6,8,8‑六甲基‑8,9‑二氢吡啶并[3,4‑g]异喹啉‑4(3H)‑酮；化合物8名称为：4‑羟基‑2,2,4,7,7,9‑六甲基‑1,2,4,7‑四氢吡啶并[4,3‑g]喹啉‑3,6‑二酮；化合物9名称为：2,2,4,7,7,9‑六甲基‑4‑(2‑氧代丙基)‑1,2,6,7‑四氢‑3H‑吡啶并[3,4‑b]氮杂卓‑3,5(4H)‑二酮；化合物10名称为：7‑(4‑羟基‑2,2,4‑三甲基‑3,4‑二氢‑2H‑吡咯‑5‑基)‑2,2‑二甲基‑2,3‑二氢喹啉‑4(1H)‑酮，具体操作按下列步骤进行：a、将天山堇菜全草粉碎，用无水甲醇溶剂冷浸、回流、渗漉、超声或微波提取2‑10次，合并提取液并干燥，得到总提取物；b、将步骤a中的总提取物用氯仿溶解，加入水进行萃取，收集氯仿层并干燥得氯仿部位，将氯仿部位用0.5N的硫酸溶解过滤，收集滤液，滤液用乙酸乙酯萃取以去除非生物碱杂质，去杂质的滤液用饱和碳酸氢钠水溶液调pH至10‑14，得到碱化液；c、将步骤b中的碱化液用二氯甲烷充分萃取并干燥，得到总生物碱；d、将步骤c中的总生物碱用体积比5:5:5:5‑1:5:1:5的正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水的两相溶剂系统进行分配，收集上相有机相，干燥得到上相部位，再将上相部位进行硅胶柱层析分段分离，以体积比100:0，85:15，70:30，55:45的环己烷:乙酸乙酯为洗脱溶剂进行梯度洗脱，得到4个部位为V100，V85，V70和V55；e、将步骤d中的V55部位用200‑300目正相硅胶分离，按体积比5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，0:1的环己烷:乙酸乙酯为洗脱溶剂，进行梯度洗脱，得到9个组分为：V551‑V559，将V556组分利用反相色谱柱：XSelect CSH C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为36％的甲醇水溶液；流速：4.0mL/min进行分离，收集并干燥64.5至66分钟的流份，即得化合物4为：8a‑羟基‑2,2,3a,6,6,8‑六甲基‑9‑亚甲基‑1,2,3a,5,6,8a,9,9a‑八氢‑3H‑吡咯并[3,2‑g]异喹啉‑3‑酮；将V558组分经反相色谱柱：XSelect CSH C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为35％的甲醇水溶液；流速：4.0mL/min分离，收集并干燥24.5至26分钟的流份，即得化合物8为：4‑羟基‑2,2,4,7,7,9‑六甲基‑1,2,4,7‑四氢吡啶并[4,3‑g]喹啉‑3,6‑二酮；将V557组分经反相色谱柱：YMC Pack Pro C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为57％的甲醇水溶液；流速：3.0mL/min分离，收集并干燥14至15分钟的流份，即得化合物9为：2,2,4,7,7,9‑六甲基‑4‑(2‑氧代丙基)‑1,2,6,7‑四氢‑3H‑吡啶并[3,4‑b]氮杂卓‑3,5(4H)‑二酮；f、将步骤d中的V70部位以无水甲醇为溶剂，经葡聚糖凝胶LH‑20分离得到V70‑1组分；V70‑1组分利用反相色谱柱：YMC Pydrosphere C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为34％的乙腈水溶液；流速：4.0mL/min进行分离，分别收集并干燥14.5分钟至16分钟的流份V70‑1‑4以及20分钟至21分钟的流份V70‑1‑7；将流份V70‑1‑4继续用反相色谱柱：YMC Pydrosphere C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为59％的甲醇水溶液；流速：2.8mL/min进行纯化，收集18.5至19.5分钟的流份，干燥即得化合物10为：7‑(4‑羟基‑2,2,4‑三甲基‑3,4‑二氢‑2H‑吡咯‑5‑基)‑2,2‑二甲基‑2,3‑二氢喹啉‑4(1H)‑酮；将流份V70‑1‑7继续用反相色谱柱：YMC Pydrosphere C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为52.8％的甲醇水溶液；流速：4.0mL/min进行纯化，收集38至39分钟的流份，干燥即得化合物5为：(Z)‑6‑(2‑羟基‑2‑甲基亚丙基)‑7‑亚氨基‑1,3,3,4a,8‑五甲基‑4a,5,6,7‑四氢异喹啉‑4(3H)‑酮；g、将步骤d中的V85部位以无水甲醇为溶剂，经葡聚糖凝胶LH‑20分离得到4个组分V85‑1，V85‑2，V85‑3，V85‑4；将组分V85‑1经反相色谱柱：YMC Pack Pro C18 5μm 10×250mm；溶剂：0‑35分钟，浓度为30％‑65％的乙腈水溶液；流速：4.0mL/min进行分离，分别收集并干燥15分钟至16分钟的流份V85‑1‑5以及23分钟至24.5分钟的流份V85‑1‑9；将V85‑1‑5经反相色谱柱：YMC Pack Pro C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为47％的乙腈水溶液；流速：3.2mL/min分离，得到化合物7为：1,3,3,6,8,8‑六甲基‑8,9‑二氢吡啶并[3,4‑g]异喹啉‑4(3H)‑酮；将V85‑1‑9经反相色谱柱：YMC Pack Pro C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为64％的乙腈水溶液；流速：3.7mL/min分离，得到化合物3为4‑(2‑羟基‑2‑甲基丙基)‑3‑亚氨基‑2,2,5,7,7,8a‑六甲基‑2,3,6,7,8a,9‑六氢‑8H‑环戊二烯并[2‑b:3,4‑c']二吡啶‑8‑酮；将组分V85‑2经反相色谱谱柱：YMC Pack Pro C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度30％的乙腈水溶液；流速：3.0mL/min分离，分别收集并干燥38.5分钟至40分钟的流份，得化合物6为：1,3,3,6,8,8‑六甲基‑3,8‑二氢吡啶并[3,4‑g]异喹啉‑4,9‑二酮。