[发明专利]一种天山堇菜中生物碱类化合物及其制备方法

权利要求书

1.一种天山堇菜中生物碱类化合物的制备方法，其特征在于该化合物的结构式为：

其中：

化合物3名称为4-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-亚氨基-2,2,5,7,7,8a-六甲基-2,3,6,7,8a,9-六氢-8H-环戊二烯并[2-b:3,4-c']二吡啶-8-酮；

化合物4名称为：8a-羟基-2,2,3a,6,6,8-六甲基-9-亚甲基-1,2,3a,5,6,8a,9,9a-八氢-3H-吡咯并[3,2-g]异喹啉-3-酮；

化合物5名称为：(Z)-6-(2-羟基-2-甲基亚丙基)-7-亚氨基-1,3,3,4a,8-五甲基-4a,5,6,7-四氢异喹啉-4(3H)-酮；

化合物6名称为：1,3,3,6,8,8-六甲基-3,8-二氢吡啶并[3,4-g]异喹啉-4,9-二酮；

化合物7名称为：1,3,3,6,8,8-六甲基-8,9-二氢吡啶并[3,4-g]异喹啉-4(3H)-酮；

化合物8名称为：4-羟基-2,2,4,7,7,9-六甲基-1,2,4,7-四氢吡啶并[4,3-g]喹啉-3,6-二酮；

化合物9名称为：2,2,4,7,7,9-六甲基-4-(2-氧代丙基)-1,2,6,7-四氢-3H-吡啶并[3,4-b]氮杂卓-3,5(4H)-二酮；

化合物10名称为：7-(4-羟基-2,2,4-三甲基-3,4-二氢-2H-吡咯-5-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢喹啉-4(1H)-酮，具体操作按下列步骤进行：

a、将天山堇菜全草粉碎，用无水甲醇溶剂冷浸、回流、渗漉、超声或微波提取2-10次，合并提取液并干燥，得到总提取物；

b、将步骤a中的总提取物用氯仿溶解，加入水进行萃取，收集氯仿层并干燥得氯仿部位，将氯仿部位用0.5N的硫酸溶解过滤，收集滤液，滤液用乙酸乙酯萃取以去除非生物碱杂质，去杂质的滤液用饱和碳酸氢钠水溶液调pH至10-14，得到碱化液；

c、将步骤b中的碱化液用二氯甲烷充分萃取并干燥，得到总生物碱；

d、将步骤c中的总生物碱用体积比5:5:5:5-1:5:1:5的正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水的两相溶剂系统进行分配，收集上相有机相，干燥得到上相部位，再将上相部位进行硅胶柱层析分段分离，以体积比100:0，85:15，70:30，55:45的环己烷:乙酸乙酯为洗脱溶剂进行梯度洗脱，得到4个部位为V100，V85，V70和V55；

e、将步骤d中的V55部位用200-300目正相硅胶分离，按体积比5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，0:1的环己烷:乙酸乙酯为洗脱溶剂，进行梯度洗脱，得到9个组分为：V551-V559，将V556组分利用反相色谱柱：XSelect CSH C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为36％的甲醇水溶液；流速：4.0mL/min进行分离，收集并干燥64.5至66分钟的流份，即得化合物4为：8a-羟基-2,2,3a,6,6,8-六甲基-9-亚甲基-1,2,3a,5,6,8a,9,9a-八氢-3H-吡咯并[3,2-g]异喹啉-3-酮；将V558组分经反相色谱柱：XSelect CSH C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为35％的甲醇水溶液；流速：4.0mL/min分离，收集并干燥24.5至26分钟的流份，即得化合物8为：4-羟基-2,2,4,7,7,9-六甲基-1,2,4,7-四氢吡啶并[4,3-g]喹啉-3,6-二酮；将V557组分经反相色谱柱：YMC Pack Pro C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为57％的甲醇水溶液；流速：3.0mL/min分离，收集并干燥14至15分钟的流份，即得化合物9为：2,2,4,7,7,9-六甲基-4-(2-氧代丙基)-1,2,6,7-四氢-3H-吡啶并[3,4-b]氮杂卓-3,5(4H)-二酮；

f、将步骤d中的V70部位以无水甲醇为溶剂，经葡聚糖凝胶LH-20分离得到V70-1组分；V70-1组分利用反相色谱柱：YMC Pydrosphere C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为34％的乙腈水溶液；流速：4.0mL/min进行分离，分别收集并干燥14.5分钟至16分钟的流份V70-1-4以及20分钟至21分钟的流份V70-1-7；将流份V70-1-4继续用反相色谱柱：YMC PydrosphereC18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为59％的甲醇水溶液；流速：2.8mL/min进行纯化，收集18.5至19.5分钟的流份，干燥即得化合物10为：7-(4-羟基-2,2,4-三甲基-3,4-二氢-2H-吡咯-5-基)-2,2-二甲基-2,3-二氢喹啉-4(1H)-酮；将流份V70-1-7继续用反相色谱柱：YMCPydrosphere C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为52.8％的甲醇水溶液；流速：4.0mL/min进行纯化，收集38至39分钟的流份，干燥即得化合物5为：(Z)-6-(2-羟基-2-甲基亚丙基)-7-亚氨基-1,3,3,4a,8-五甲基-4a,5,6,7-四氢异喹啉-4(3H)-酮；

g、将步骤d中的V85部位以无水甲醇为溶剂，经葡聚糖凝胶LH-20分离得到4个组分V85-1，V85-2，V85-3，V85-4；将组分V85-1经反相色谱柱：YMC Pack Pro C18 5μm 10×250mm；溶剂：0-35分钟，浓度为30％-65％的乙腈水溶液；流速：4.0mL/min进行分离，分别收集并干燥15分钟至16分钟的流份V85-1-5以及23分钟至24.5分钟的流份V85-1-9；将V85-1-5经反相色谱柱：YMC Pack Pro C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为47％的乙腈水溶液；流速：3.2mL/min分离，得到化合物7为：1,3,3,6,8,8-六甲基-8,9-二氢吡啶并[3,4-g]异喹啉-4(3H)-酮；将V85-1-9经反相色谱柱：YMC Pack Pro C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度为64％的乙腈水溶液；流速：3.7mL/min分离，得到化合物3为4-(2-羟基-2-甲基丙基)-3-亚氨基-2,2,5,7,7,8a-六甲基-2,3,6,7,8a,9-六氢-8H-环戊二烯并[2-b:3,4-c']二吡啶-8-酮；将组分V85-2经反相色谱谱柱：YMC Pack Pro C18 5μm 10×250mm；溶剂：浓度30％的乙腈水溶液；流速：3.0mL/min分离，分别收集并干燥38.5分钟至40分钟的流份，得化合物6为：1,3,3,6,8,8-六甲基-3,8-二氢吡啶并[3,4-g]异喹啉-4,9-二酮。