[发明专利]一种检测MET基因14外显子突变的探针库、检测方法和试剂盒

摘要

本发明提供一种检测MET基因14外显子突变的探针及检测方法，所述DNA探针库包括一个或多个能够与MET基因14外显子及相邻内含子进行杂交的DNA探针。所述DNA探针可以如SEQ ID NO.1～46所示。此外，本发明提供利用该探针库对MET基因14外显子及相邻内含子进行富集及检测的方法，采用此方法与下一代测序技术（NGS）相结合可以极大地提高MET14基因检测的敏感性，准确性与全面性。

主权项

试剂盒在用于非治疗与诊断目的的MET基因14外显子突变测序中的应用，所述试剂盒包括核苷酸序列如SEQ ID NO. 1～46所示的全部探针；所述的应用中，包括如下步骤：1）获得受试者的DNA样本库；2）获得所述的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1～46所示的全部探针；3）使所述的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1～46所示的全部探针与所述DNA样本库进行杂交；和4）分离步骤3）的杂交产物，然后释放经杂交富集的MET基因14外显子基因片段；采用下一代测序技术，通过对富集到的MET基因14外显子片段进行测序而检测所述MET基因14外显子片段的突变；所述步骤1）中的DNA样本库由双链DNA片段组成；所述步骤1）包括：提取全基因组DNA，然后将其片段化；或者提取mRNA，将其片段化，然后以该经片段化的mRNA为模板合成双链cDNA；所述受试者为哺乳动物；哺乳动物是人；从受试者的细胞、组织或体液样本中提取全基因组DNA或mRNA；所述DNA片段的长度为150～200bp；所述步骤3）包括：3‑1）采用选择性标记标记DNA探针库中的DNA探针；和3‑2）使所述DNA探针库与DNA样本库进行杂交；所述步骤3‑1）中的选择性标记为生物素；所述步骤3‑2）包括在PCR扩增仪中，在65℃下将所述DNA探针库与DNA样本库孵育24小时；所述方法的步骤4）中，利用DNA探针上的选择性标记分离杂交产物；所述步骤4）中利用链霉亲和素‑生物素的亲和作用分离杂交产物。