[发明专利]一种快速测定饲料添加剂中6种大豆异黄酮的方法

摘要

本发明公开了一种快速测定饲料添加剂中6种大豆异黄酮的方法，6种大豆异黄酮分别为大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素和染料木素。首先用80％乙醇提取饲料添加剂产品中的大豆异黄酮，离心取上清液，过滤后进行HPLC检测。本发明采用HPLC法，能够快速测定饲料添加剂产品中6种大豆异黄酮成分的含量。本方法中样品前处理简单，分析速度快，重复性、准确度高，能够为饲料添加剂产品质量评价与控制提供高效准确的分析手段。

主权项

一种快速测定饲料添加剂中6种大豆异黄酮的方法，所述6种大豆异黄酮分别为黄豆黄素、黄豆黄苷、大豆苷元、大豆苷、染料木素及染料木苷，其特征在于：按照下述步骤进行：A、选择6种大豆异黄酮的标准品如下：黄豆黄素、黄豆黄苷、大豆苷元、大豆苷、染料木素及染料木苷的标准品；B、标准品配制：分别称取大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素和染料木素6种标准品各5mg，4mg，5mg，5mg，4mg，5mg，精确到0.01mg，6种标准品中分别加80％乙醇溶解定容至50mL，100mL，50mL，50mL，100mL和50mL，分别配制成浓度为100mg/L，40mg/L，100mg/L,100mg/L，40mg/L和100mg/L作为标准品母液；C、从步骤B中得到的6种标准品母液中分别称取大豆苷母液1mL、黄豆黄苷母液2mL、染料木苷母液1mL、大豆苷元母液1mL、黄豆黄素母液2mL和染料木素母液1mL配制成混标，浓度分别为12.5mg/L，10mg/L，12.5mg/L，12.5mg/L，10mg/L和12.5mg/L，作为标准品溶液，供上机用；D、样品前处理：精密称定大豆异黄酮供试品0.1g，精确到0.0001g，加入80％乙醇约80mL，超声波加热助溶30min，冷却后再用80％乙醇定容在100mL容量瓶中，取部分混匀后的溶液，以4000r/min离心5min，取上清液，用0.45μm微孔滤膜过滤即为待测样品，等待进样，同一样品测两次平行；E、色谱条件：色谱柱：Athena—C18(4.6*150mm,5μm)，流动相A为0.1％乙酸水溶液，流动相B为0.1％乙酸乙腈溶液，流动相采用梯度洗脱程序：0min：90％A+10％B；12.5min：70％A+30％B；17.5min：60％A+40％B；18.5min：100％B；21min：100％B；22.5min：90％A+10％B；26.5min：90％A+10％B；30min：90％A+10％B；流速1mL/min，柱温40℃，紫外检测波长254nm；进样量10μL，运行时间30min；F、通过外标法进行计算，得出样品溶液中大豆苷、黄豆黄苷、染料木苷、大豆苷元、黄豆黄素和染料木素的含量。