[发明专利]一种金黄色葡萄球菌肽聚糖的多克隆抗体

摘要

本发明提供一种金黄色葡萄球菌肽聚糖抗原的多克隆抗体。获得该多克隆抗体的步骤有以金黄色葡萄球菌为出发菌株制备的肽聚糖作为免疫原，免疫家兔获得多克隆抗体。最终采用饱和硫酸铵盐析法和免疫亲和层析对获取的抗金黄色葡萄球菌肽聚糖多克隆抗体进行纯化制备。采用本发明制备的多克隆抗体效价高、纯度高，而且在识别其他革兰氏阳性菌肽聚糖的同时不识别革兰氏阴性菌肽聚糖，为国内首例使用免疫亲和层析方法制备得到的抗金黄色葡萄球菌肽聚糖抗原的多克隆抗体，为以多克隆抗体灵敏度高的优点，单克隆抗体特异性好的优点，将两种抗体进行配对，建立检测革兰氏阳性菌打下了基础，在医疗和科研领域具有广阔的应用前景。

主权项

一种金黄色葡萄球菌肽聚糖多克隆抗体，其特征在于该肽聚糖多克隆抗体通过如下方法取得：一、免疫动物(1)以与单克隆抗体3F8相同免疫原的金黄色葡萄球菌肽聚糖作为免疫原，免疫新西兰家兔；具体方法为：①新西兰家兔，筛选条件为：雄性，单重在2.5kg‑3.0kg之间；②首次免疫剂量为500ug糖/只，佐剂为弗氏完全佐剂，与二次免疫间隔为3周；③二次免疫免疫剂量为250ug糖/只，佐剂为弗氏不完全佐剂，与三次免疫间隔为2周；④三次及以后免疫剂量、途径、佐剂同第二次免疫方式，两次免疫之间的间隔时间为2周，至第六次免疫；二、多克隆抗体的获得(1)效价测定：免疫过程中，从第三免以后，每次免疫后7天采血测定效价，至第六免确定血清效价稳定；(2)抗血清分离：六免后血清效价达到1：10000以上，股动脉放血收集血清样本，分装后‑20℃保存；(3)饱和硫酸铵盐析法进行初步纯化①取定量家兔血清与PBS缓冲液等体积混匀后，缓慢加入2倍家兔血清体积的饱和硫酸铵溶液，并进行4℃过夜；②次日离心，取沉淀并用PBS缓冲液溶解，再加入与PBS缓冲液等体积的饱和硫酸铵溶液，4℃透析，获得初步纯化产物；(4)亲和层析进一步纯化得到多克隆抗体采用GE ProteinA柱子进行亲和层析纯化，进一步纯化后得到多克隆抗体。