[发明专利]一种利用热带爪蟾胚胎测定化学品发育毒性的方法

摘要

本发明公开了一种利用热带爪蟾胚胎测定化学品发育毒性的方法，所述的方法通过挑选发育时期一致的热带爪蟾胚胎的胚胎，然后进行化学品毒性对比暴露实验，通过显微镜照相系统获取每只胚胎的特征图像，从而根据每组胚胎的畸形类型及表型特征体系对应的畸形系数来判断化学品的毒性程度，所建立的胚胎的畸形类型及表型特征体系覆盖全面，原理简单，数据易整理，结果直观。

主权项

一种利用热带爪蟾胚胎测定化学品发育毒性的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：(1)挑选合适的胚胎，然后用胚胎培养液清洗2‑3次去除坏卵和杂质后，置于胚胎培养液中，在25℃，无光照的恒温培养箱中进行静置培养，在显微镜下挑选来自同一亲本、正常发育比率达80％以上且发育时期一致的热带爪蟾胚胎，备用；(2)化学品毒性对比暴露实验：a.将待测的化学品溶于标准稀释水中，分别配制成10mg/L、30mg/L、50mg/L的待测液装入试剂瓶中，每个试剂瓶中装待测液20ml，将试剂瓶用膜封口后置于2℃冰箱避光保存，备用；b.将挑选的热带爪蟾活体胚胎分为四组，每组10‑20只，分别标记为试验组1、试验组2、试验组3、对照组，每组的热带爪蟾活体胚胎生理情况无明显差异，具有可比性；c.将试验组的胚胎进行活体培养，然后给三组试验组中分别加入10mg/L、30mg/L、50mg/L的待测液，对照组继续使用胚胎培养液培养，然后将所述的胚胎置于多功能培养箱中进行暴露实验，光照12h，黑暗12h，24h后观察每组是否有胚胎死亡，记录死亡数据，将未死亡的胚胎取出后使用100mg/L MS‑222麻醉处理后，然后固定在6％的甲醛溶液中，备用；(3)使用解剖镜观察不同化学品浓度下胚胎的发育情况，通过显微镜照相系统获取每只胚胎的特征图像，并将试验组于对照组进行比较，从而根据每组胚胎的畸形类型及表型特征体系对应的畸形系数来判断化学品的毒性程度。