[发明专利]基于切除修复由酶介导的两步串联信号放大检测UDG活性的方法有效
| 申请号： | 201710104367.1 | 申请日： | 2017-02-24 |
| 公开（公告）号： | CN106929563B | 公开（公告）日： | 2018-10-12 |
| 发明（设计）人： | 张春阳;王黎娟;任明 | 申请（专利权）人： | 山东师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/34 | 分类号： | C12Q1/34;G01N21/64 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 王志坤 |
| 地址： | 250014 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于切除修复由酶介导的两步串联信号放大检测UDG活性的方法，步骤如下：(1)将UDG作用底物加入到切除反应缓冲液中，进行切除修复反应，将UDG作用底物的尿嘧啶碱基切除，留下一个脱碱基位点；(2)将切除修复反应产物加入到扩增反应缓冲液中，进行酶辅助两步串联信号放大反应，即引发链置换反应和指数扩增反应，循环产生增强的荧光信号，通过荧光信号的强弱测定UDG的活性。本发明利用恒温指数扩增反应的高扩增效率和核糖核酸酶H的特异性循环消化，实现了对尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)活性超高灵敏检测。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 切除 修复 酶介导 串联 信号 放大 检测 udg 活性 方法 | ||
【主权项】：
1.一种用于非疾病诊断为目的的基于切除修复由酶介导的两步串联信号放大检测UDG活性的方法，其特征在于，步骤如下：(1)将UDG作用底物加入到切除反应缓冲液中，进行切除修复反应，将UDG作用底物上的尿嘧啶碱基切除，留下一个脱碱基位点；(2)将切除修复反应产物加入到扩增反应缓冲液中，进行酶辅助两步串联信号放大反应，即引发链置换反应和指数扩增反应，循环产生增强的荧光信号，通过荧光信号的强弱测定UDG的活性；所述UDG作用底物为发夹探针结构，所述发夹探针的茎部5′端有一个尿嘧啶碱基，其与互补链上的腺嘌呤互补配对；其环部上有一个切刻内切酶的识别位点；所述扩增反应缓冲液中，包含：BstDNA聚合酶、限制性核酸内切酶、指数扩增模板、信号探针、核糖核酸酶H、NEB缓冲液、ThermoPol缓冲液和核糖核酸酶H缓冲液；所述切除反应缓冲液包含待检测的尿嘧啶DNA糖基化酶、核酸内切酶IV和NEB缓冲液。
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