[发明专利]一种利用抑菌培养基培育柳枝稷的组培方法

摘要

本发明涉及一种利用抑菌培养基培育柳枝稷的组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、无菌水制备、诱导培养、愈伤组织增殖、分化培养、生根培养和瓶苗移栽。本发明的柳枝稷抑菌组培过程中，培养容器和培养基都无需高温高压灭菌，减少了工作量和能源消耗，简化了柳枝稷组培技术环节，降低了柳枝稷组培成本；而且操作简单，只需按不同的培养基配方配制后即可使用，实用性强，推广性好。本发明的柳枝稷抑菌组培方法与常规的柳枝稷组培方法相比，可以降低成本10％以上。

主权项

一种利用抑菌培养基培育柳枝稷的组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、无菌水制备、诱导培养、愈伤组织增殖、分化培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：(1)培养容器消毒：将培养瓶、瓶盖及接种用的塑料盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L环丝氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸钠的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；(2)培养基配制：诱导培养基为：MS+3～6mg/L 2,4‑D+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+0.5～2mg/L环丝氨酸+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；愈伤组织增殖培养基为：MS+2～4mg/L 2,4‑D+0.5～2mg/L 6‑BA+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+0.5～2mg/L环丝氨酸+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；分化培养基为：MS+0.2～1mg/L 6‑BA+0.1～0.5mg/L NAA+0.2～1mg/L GA3+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+0.5～2mg/L环丝氨酸+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+0.5～1mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+0.5～2mg/L环丝氨酸+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS，为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述2,4‑D，指2,4‑二氯苯氧乙酸；所述6‑BA，指6‑苄氨基嘌呤；所述NAA，指α‑萘乙酸；所述GA3，指赤霉素；配制培养基时，先称各培养基配方中的蔗糖和琼脂粉，加培养基总重量1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；(3)无菌水的制备：采用次氯酸钠、环丝氨酸、十二烷基磺酸钠和水配制无菌水，终浓度为100mg/L次氯酸钠、10mg/L环丝氨酸、0.5mg/L十二烷基磺酸钠，现配现用；(4)诱导培养：选取田间生长健壮无病虫害的植株，剥取1～1.2cm的幼穗，用体积比为75％的乙醇进行表面消毒1min，再用质量体积比为0.1％的升汞溶液灭菌5～8min，无菌水冲反复冲洗不少于3次；在超净工作台上，将处理好的幼穗切成长度为不超过3mm的小段，接种到诱导培养基中，培养30d后诱导出愈伤组织；培养室温度为26℃，暗培养；(5)愈伤组织增殖：将诱导出的愈伤组织转接到愈伤组织增殖培养基中，每15d转接一次，大量增殖；培养室温度为26℃，暗培养；(6)分化培养：将愈伤组织转入分化培养基中，30d后逐步诱导出小芽，小芽逐步发育成不具根的幼苗；培养室温度为26℃，光照16h，光照强度为2000Lx；(7)生根培养：取高度为2～3cm芽苗，接种到生根培养基上，培养25d后成为完整植株；培养室温度为26℃，光照16h，光照强度为2000Lx；(8)瓶苗移栽：将生根培养获得的完整植株取出，洗净根部的培养基，用800倍的多菌灵浸泡30min后，移栽至透水性好的基质中，大棚上层用遮光网遮盖，移栽的环境温度为22～28℃；所述透水性好的基质，如草木灰:沙子:耕作土＝1:1:1。