[发明专利]一种利用抑菌培养基培育柳枝稷的组培方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物组织培养方法，具体涉及一种利用抑菌培养基培育柳枝稷的组培方法，属生物技术领域。

背景技术

柳枝稷(Panicum virgatum L.)属禾本科黍属，是美国本土多年生的C4草本植物。柳枝稷植株高大，具有根系发达、防风固沙能力强、耐瘠薄等优点，对土壤环境要求低，一直以来作为饲草来用。近年来，因其生物量大、易降解等特性而被作为能源植物进行开发利用，因此又有“能源草”的称谓。

我国自20世纪80年代开始进行柳枝稷的引种、试种，科研工作者通过育种技术对柳枝稷的一些不良性状进行改良，以更加适宜当地种植并提高经济效益。然而，柳枝稷是一种异型杂交的多倍体单子叶植物，具有高度的自交不亲和性，通过常规育种技术对其某些性状进行改良十分困难。因此，通过基因工程技术对柳枝稷进行遗传改良获得变得尤为重要，而基因工程技术的应用前提是建立高效的植物组织培养体系。目前，转基因技术在柳枝稷新品种培育方面已取得较大进展。

柳枝稷组织培养的成本主要包括组培苗生产所需的培养基、设施设备、供电成本、耗材和人工成本。常规的柳枝稷组织培养方法要求外植体接种在高温高压灭菌后的无菌培养基中才能正常生长，耗能大，人工操作成本高。如果能通过抑菌的方法来改造培养基，使培养基在不需要进行高温高压灭菌，就能够获得柳枝稷的正常生长。这样，一方面可以降低柳枝稷组织培养对设施设备的要求，尤其不需要高温高压灭菌所需配置的高压锅设备，缩减了投资成本，电能消耗也将大幅度降低；另一方面，采用这种培养基开展柳枝稷组织培养，组培环节大为简化，人工操作的速度大幅提高，从而降低了人工成本。此外，由于改造后的培养基自身具有杀菌、抗菌或抑菌作用，能有效控制组织培养过程中的污染问题，又不会对柳枝稷生长产生毒害或抑制，即不影响柳枝稷的正常生长，从根本上简化了柳枝稷组织培养。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用抑菌培养基培育柳枝稷的组培方法。

本发明的目的是通过以下方法实现的。

本发明的一种利用抑菌培养基培育柳枝稷的组培方法，包括培养容器消毒、培养基配制、无菌水制备、诱导培养、愈伤组织增殖、分化培养、生根培养和瓶苗移栽，其特征在于：

1.培养容器消毒：将培养瓶、瓶盖及接种用的塑料盘在100mg/L次氯酸钠+10mg/L环丝氨酸+0.5mg/L十二烷基磺酸钠的水溶液中浸泡不少于10h，保存备用；

2.培养基配制：诱导培养基为：MS+3～6mg/L 2,4-D+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+0.5～2mg/L环丝氨酸+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；愈伤组织增殖培养基为：MS+2～4mg/L 2,4-D+0.5～2mg/L 6-BA+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+0.5～2mg/L环丝氨酸+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；分化培养基为：MS+0.2～1mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/L NAA+0.2～1mg/L GA3+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+0.5～2mg/L环丝氨酸+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；生根培养基为1/2MS+0.5～1mg/L NAA+40～100mg/L次氯酸钠+1～5mg/L乳酸链球菌素+0.5～2mg/L环丝氨酸+10～50mg/L丙酸钙+0.05～0.2mg/L十二烷基磺酸钠+30g/L蔗糖+3.0g/L琼脂粉，pH5.8；所述MS，为1962年，Murashige和Skoog公开的MS培养基；所述2,4-D，指2,4-二氯苯氧乙酸；所述6-BA，指6-苄氨基嘌呤；所述NAA，指α-萘乙酸；所述GA3，指赤霉素；配制培养基时，先称各培养基配方中的蔗糖和琼脂粉，加培养基总重量1/2的自来水，加热至琼脂粉完全溶解，再按各培养基配方配齐其他原料后，定容，然后用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl调pH值至5.8，分装到消毒过的培养容器中，封口，冷却凝固后备用；

3.无菌水的制备：采用次氯酸钠、环丝氨酸、十二烷基磺酸钠和水配制无菌水，终浓度为100mg/L次氯酸钠、10mg/L环丝氨酸、0.5mg/L十二烷基磺酸钠，现配现用；