[发明专利]一种缩宫素的制备方法

摘要

本发明提供了一种缩宫素的制备方法，以CTC树脂为固相载体，采用固相合成法合成第一中间体，液相合成法合成第二中间体，然后再将两个中间体缩合得到缩宫素前体，将所述缩宫素前体依次脱去其中的Trt和切肽，得到缩宫素。本发明提供的制备方法简化了缩宫素的制备步骤，降低了缩宫素制备成本，具有较高的产率；而且本发明制备得到的缩宫素具有较高的纯度和效价。实施例结果表明，本发明提供的方法制备得到的缩宫素纯度高达99％以上，缩宫素纯化产率高达46.5％，生物效价高达560IU/mg以上。

主权项

1.一种缩宫素的制备方法，包括以下步骤：1)以CTC树脂为固相载体，将氨基酸保护单体Boc‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH、Fmoc‑Ile‑OH、Fmoc‑Gln(Trt)‑OH、Fmoc‑Asn(Trt)‑OH、Fmoc‑Cys(Trt)‑OH在缩合剂和碱性条件下依次进行缩合反应，从树脂上切割后得到第一中间体；所述缩合反应用脱帽试剂为哌嗪，所述第一中间体的氨基酸序列为：Boc‑Cys(Trt)‑Tyr(tBu)‑Ile‑Gln(Trt)‑Asn(Trt)‑Cys(Trt)‑OH；2)以Fmoc‑Pro‑Leu‑OH、Gly‑NH2、BOP和HOBt为原料，合成Fmoc‑Pro‑Leu‑Gly‑NH2，用二乙胺脱去所述Fmoc‑Pro‑Leu‑Gly‑NH2中的Fmoc，得到第二中间体；所述第二中间体的氨基酸序列为：H‑Pro‑Leu‑Gly‑NH2；3)将所述步骤1)得到的第一中间体和步骤2)得到的第二中间体进行缩合反应，所用的缩合剂为DCC‑HOOBt或DPPA或DCC‑HOBt，得到缩宫素前体1，所述缩宫素前体的氨基酸序列为：Boc‑Cys(Trt)‑Tyr(tBu)‑Ile‑Gln(Trt)‑Asn(Trt)‑Cys(Trt)‑Pro‑Leu‑Gly‑NH2；4)用碘脱去所述步骤3)得到的缩宫素前体1中的Trt，形成二硫键，再经切肽后得到具有式I所示结构的缩宫素；所述步骤1)和步骤2)之间无时间顺序限定；步骤1)中所述的哌嗪以哌嗪溶液的状态参与反应，所述哌嗪溶液的溶剂为DMF，所述的哌嗪溶液的浓度为0.58M；所述步骤1)中CTC树脂的取代度为0.6～0.9mmol/g；所述步骤1)中每种氨基酸保护单体在反应体系中的浓度独立为树脂取代度的1.95～2.05当量；所述步骤1)中缩合剂为O‑苯并三氮唑‑N,N,N',N'‑四甲基脲六氟磷酸酯；所述的缩合剂在反应体系中的浓度为缩合反应对应单个氨基酸保护单体的0.95～1当量；所述步骤1)中的碱性条件由N,N‑二异丙基乙胺提供，所述N,N‑二异丙基乙胺在反应体系中的浓度为缩合反应对应单个氨基酸保护单体的1～1.5当量；所述步骤3)中第二中间体为第一中间体的1.2当量；所述步骤3)中缩合反应用缩合剂为叠氮磷酸二苯酯或二环己基碳二亚胺‑1‑羟基苯并三唑或二环己基碳二亚胺‑3‑羟基‑1,2,3‑苯并三嗪‑4(3H)‑酮；所述步骤4)中的碘为单质碘；所述碘的物质的量为缩宫素前体物质的量的5～10当量，所述碘在步骤4)反应体系中的浓度为0.1M～0.5M；所述步骤4)中切肽用试剂为含TIS的三氟乙酸溶液。