[发明专利]一种缩宫素的制备方法

说明书

本发明提供了一种缩宫素的制备方法，以CTC树脂为固相载体，采用固相合成法合成第一中间体，液相合成法合成第二中间体，然后再将两个中间体缩合得到缩宫素前体，将所述缩宫素前体依次脱去其中的Trt和切肽，得到缩宫素。本发明提供的制备方法简化了缩宫素的制备步骤，降低了缩宫素制备成本，具有较高的产率；而且本发明制备得到的缩宫素具有较高的纯度和效价。实施例结果表明，本发明提供的方法制备得到的缩宫素纯度高达99％以上，缩宫素纯化产率高达46.5％，生物效价高达560IU/mg以上。

技术领域

本发明涉及多肽合成技术领域，尤其涉及一种缩宫素的制备方法。

背景技术

缩宫素又称催产素，是一种子宫收缩药，临床用于催产、引产、防治产后出血和产后复旧不全，并有促进泌乳作用。

目前，国内的缩宫素原料药基本上自猪或牛下丘脑垂体后叶中提取，效价160IU/ml，效价低，并且动物来源的产品存在生物安全性风险，同时存在加压素等杂质，难以被纯化除去。

人工合成缩宫素的方法主要包括固相合成法和液相合成法，目前，缩宫素合成方法主要有液相法和Fmoc固相法。其中，中国发明专利ZL2010102549195公布了一种液相合成缩宫素的方法:该方法用金属钠/液氨法脱去保护基，然后，用空气氧化法形成二硫键，收率25％，未见生物效价报道；中国发明专利(专利号ZL2005101123565)公布了一种固相合成缩宫素的方法:该方法以Rink Amide树脂为固相载体，Fmoc保护氨基酸为单体，其中半胱氨酸采用Fmoc-Cys(Trt)-OH，使用哌啶作为脱帽试剂，依次逐个合成了保护缩宫素氨基酸序列，然后，将肽链从树脂上切割下来，乙醚沉淀切肽溶液获得还原性缩宫素后，在偏碱性溶液中(pH7-8)用空气、或双氧水进行氧化，形成二硫键，收率21％，未见报道效价；中国发明专利(ZL201210256922X)公布了一种固相合成缩宫素的方法:该方法以Rink Amide树脂为固相载体，Fmoc保护氨基酸为单体，其中N末端半胱氨酸采用Boc-Cys(Trt)-OH，使用哌啶作为脱帽试剂，依次逐个合成了保护缩宫素氨基酸序列，然后，将肽链从树脂上切割下来，乙醚沉淀切肽溶液获得未环化的缩宫素后，在偏碱性溶液中用空气、或双氧水进行氧化，形成二硫键，其收率33％，未见报道效价。这些缩宫素固相合成法的共同点是：1)环化反应均采用空气氧化法、或双氧水氧化法形成二硫键，收率最高为33％；2)N末端氨基在未保护(游离)状态下进行环化反应；3)脱帽试剂均采用易制毒化学品哌啶；4)未见报道缩宫素的生物效价、或可参考的生物效价。

综上所述，使用易制毒化学品哌啶、乙醚等，难以掌控的反应条件(如金属钠/液氨等)；现有技术中缩宫素的合成方法反应步骤多，产率、纯度不能满足需求。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种工艺简单、成本低，产率高的缩宫素合成方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种缩宫素的制备方法，包括以下步骤：

1)以CTC树脂为固相载体，将氨基酸保护单体Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH，，和Boc-Cys(Trt)-OH在缩合剂和碱性条件下依次进行缩合反应，得到第一中间体；脱帽试剂为哌嗪溶液，所述第一中间体的氨基酸序列为：Boc-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(Trt)-OH；

2)以Fmoc-Pro-Leu-OH，Gly-NH₂，BOP，HOBt为原料，合成Fmoc-Pro-Leu-Gly-NH₂，用二乙胺脱去Fmoc-Pro-Leu-Gly-NH2上的Fmoc得到第二中间体；所述第二中间体的氨基酸序列为：H-Pro-Leu-Gly-NH₂；