[发明专利]一种淋巴细胞染色体G带的制备方法

摘要

本发明公开了一种淋巴细胞染色体G带的制备方法，属于生物技术领域。其包括接种、收获细胞、细胞固定和制片4个步骤。本发明解决现有技术的不足，提供一种更省时、标准化、分散程度高、分裂相的质量更好，带纹更清晰易分析的淋巴细胞染色体G带的制备方法，且实验流程标准化、操作简单，效果稳定可控。

主权项

一种淋巴细胞染色体G带的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1：接种1.1.取外周血，接种于3mL含小牛血清的淋巴细胞培养液中，于37℃恒温培养68‑74h；1.2.于终止培养前1.5h，加入秋水仙素，得到血液和培养液的混合液；步骤2：收获细胞2.1.将步骤1.2得到的血液和培养液的混合液，倒入离心管内，1500r/min离心10‑15min，取出，弃去上清；2.2.低渗：加入已预温至37℃的8mL的0.075mol/L KCl中，混匀，再于37℃恒温孵育12min；步骤3：细胞固定3.1.加入固定液2mL，混匀，静置2min，1500r/min离心10‑15min；3.2.取出，弃去上清，加入固定液8mL，混匀，静置30min，1500r/min离心10‑15min；3.3.取出，弃去上清，加入固定液8mL，混匀，静置2‑3h，1500r/min离心10‑15min；3.4.取出，弃去上清，加入固定液，混匀，制成细胞悬液；步骤4：制片4.1.滴片：将步骤3.4制成的细胞悬液充分混匀，将细胞悬液滴于玻片左侧1/3处，随后将玻片向右下倾斜，待细胞悬液自然扩散直至布满整张玻片；4.2.将玻片水平放置，于60‑70℃干燥烘烤过夜或75‑80℃烘烤3h，经胰酶消化和吉姆萨染色，即得所述淋巴细胞染色体G带。