[发明专利]一种基于Nafion修饰的玻碳电极检测凝血酶的方法

摘要

本发明公开一种基于Nafion修饰的玻碳电极定量检测凝血酶的方法，其中Nafion修饰到玻碳电极上，会在玻碳电极上形成具有较强负电性的Nafion膜。在同时加入凝血酶的情况下，凝血酶能挣脱出DNA双链中的适配体链，释放出修饰有亚甲基蓝的互补DNA单链，此时再加入Exo I，单链DNA将被特异性剪切，产生大量具有亚甲基蓝的DNA短碎片，该碎片所含碱基少，则负电性小，能够靠近电极产生较强的电化学信号，通过信号的差异，即可检测凝血酶的浓度。本发明具有操作简单、成本低、灵敏度高、特异性好、稳定性好等优点。

主权项

1.一种基于Nafion修饰的玻碳电极定量检测凝血酶的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）使用传统的溶剂挥发法，将Nafion修饰到玻碳电极上，在玻碳电极上形成带有较强负电性的膜；（2）设计凝血酶适配体DNA链及其互补链，并在适配体互补链一端修饰电活性物质―亚甲基蓝；（3）DNA杂交反应，适配体链与其互补链混合杂交形成双链DNA结构；（4）加入含有目标物凝血酶的待测样品，凝血酶与适配体链特异性结合，释放修饰有亚甲基蓝的DNA单链；（5）DNA酶切反应，用Exo I酶酶解单链的标记有亚甲基蓝的DNA链，释放出连接有亚甲基蓝的DNA碎片；（6）Nafion修饰的玻碳电极作为工作电极进行检测，多通路电信号读取装置检测并记录体系的电化学信号，分析凝血酶的含量。