[发明专利]一种免疫微球层析法检测肝素结合蛋白检测试纸

摘要

本发明涉及临床感染性疾病标志物检测的技术领域，具体涉及了一种免疫微球层析法检测肝素结合蛋白检测试纸。包括如下步骤：定标曲线制备；含有兔抗人肝素结合蛋白抗体的检测缓冲液的制备，荧光或彩色乳胶微球标记的鸡抗兔二抗的制备，样品垫包被固相、包被有鼠抗人肝素结合蛋白抗体检测线和包被有羊抗兔抗体质控线的反应垫制备、分离膜组装、试纸条的组装、临床样本检测，并将干燥的试纸条置于铝箔袋内。本发明荧光层析法检测肝素结合蛋白检测试纸具有较高成本效益，并定量检测和评估肝素结合蛋白在患者的体液中的水平。该方法用于POCT检测系统，以及筛选或检测患者体液中肝素结合蛋白的变化以确定对感染标志物的检测方法，能够使肝素结合蛋白检测技术成为临床常规检测项目。

主权项

1.一种免疫微球层析法检测肝素结合蛋白检测试纸，可以在临床帮助诊断患者中肝素结合蛋白水平，包括使用即时免疫层析定量或定性测定患者中肝素结合蛋白的体液水平是否高于预定范围，其特征在于，包括如下步骤：S1、定标曲线制备，因肝素结合蛋白指标在不同体液评判不同感染的浓度水平，对肝素结合蛋白检测范围进行标定，其特征在于标定的标准溶液包含但不限于0.1ug/L、0.5ug/L、1ug/L、5ug/L、10ug/L、50ug/L、100ug/L、150ug/L、200ug/L、250ug/L；S2、含有肝素结合蛋白抗体的检测缓冲液的制备，其特征在于用包含但不限于缓冲液、蛋白保护剂、糖类、表面活性剂、防腐剂的一种或几种组合配制检测缓冲液，抗体来源包括但不限于兔抗人、鼠抗人肝素结合蛋白抗体，抗体浓度包含但不限于1ng/ul‑3ng/ul；S3、微球标记的二抗的制备，其特征在于用包含但不限于缓冲液、血清白蛋白、糖类、表面活性剂、防腐剂的一种或几种组合配制标记缓冲液，用羧基化或氨基化的荧光或彩色乳胶微球标记二抗，抗体浓度包含但不限于0.1ug/ul‑3ug/ul；S4、样品垫包被固相，其特征在于应用但不限于玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜、醋酸纤维素膜、NC膜，用一种或几种防腐剂、表面活性剂、血清白蛋白、氯化钠、糖类试剂进行浸泡，将步骤S3中的标记二抗固相喷涂于样品垫，置于37‑56℃干燥处理，储存于密封包装袋中待用；S5、包被鼠抗人肝素结合蛋白抗体检测线制备，其特征在于抗体包被量包括但不限于0.1‑1ug/cm，抗体包被缓冲液包含一种或几种防腐剂、表面活性剂、血清白蛋白、氯化钠、糖类试剂组合，置于37‑56℃干燥处理；S6、包被有羊抗兔抗体质控线制备、其特征在于配制羊抗兔抗体质控液，按照0.1‑2ug/cm的量包被质控线；S7、分离膜及试纸条的组装、试纸条的组装，其特征在于将S3中标记二抗的样本垫组装到带有黏胶载体塑料板一端，用力按压，将包被有质控线和检测线的膜组装于试纸条中部，试纸条的另一端粘贴吸水膜，维持样品侧向层析，将试纸条放入塑料盒中，将样品垫的一段放置在塑料盒底部，吸水纸一端固定于塑料盒顶端；S8、临床样本检测，其特征在于根据肝素结合蛋白标准曲线，室温下在试纸条的样品垫部位依次加入检测缓冲液和患者样本，定量检测肝素结合蛋白水平；在步骤S1中所述的肝素结合蛋白标定曲线范围，评判不同的感染指标，其特征在于严重败血症患者样本中的HBP浓度优选大于20ng/ml、对于细菌性脑膜炎患者样本中的HBP浓度优选大于50ng/ml、对于尿路感染的患者样本中HBP浓度优选大于50ng/ml。在步骤S1中所述的患者样本根据感染检测需要包括但不限于血液和尿液，在步骤S2中加入的缓冲液包括但不限于PBS、HEPES、Tris缓冲液；加入的糖类物质包括但不限于加入蔗糖、海藻糖、葡萄糖等糖类，糖类物质加入比例包括但不限于1％‑10％；加入的血清白蛋白包括但不限于BSA、HSA、标准血清，比例包括但不限于1％‑10％；。