[发明专利]一种免疫微球层析法检测肝素结合蛋白检测试纸

说明书

本发明涉及临床感染性疾病标志物检测的技术领域，具体涉及了一种免疫微球层析法检测肝素结合蛋白检测试纸。包括如下步骤：定标曲线制备；含有兔抗人肝素结合蛋白抗体的检测缓冲液的制备，荧光或彩色乳胶微球标记的鸡抗兔二抗的制备，样品垫包被固相、包被有鼠抗人肝素结合蛋白抗体检测线和包被有羊抗兔抗体质控线的反应垫制备、分离膜组装、试纸条的组装、临床样本检测，并将干燥的试纸条置于铝箔袋内。本发明荧光层析法检测肝素结合蛋白检测试纸具有较高成本效益，并定量检测和评估肝素结合蛋白在患者的体液中的水平。该方法用于POCT检测系统，以及筛选或检测患者体液中肝素结合蛋白的变化以确定对感染标志物的检测方法，能够使肝素结合蛋白检测技术成为临床常规检测项目。

技术领域

本发明涉及感染性疾病的生物标志物肝素结合蛋白检验技术领域，尤其涉及一种免疫微球层析法检测肝素结合蛋白检测试纸制备方法。

背景技术

HBP作为一种炎症标志物，比降钙素原具有更高的灵敏度和特异性。因为HBP主要是由PMN受外界刺激所释放，所以正常人血中HBP含量很低，一般不超过10ng/mL，当有感染发生时，部分细菌侵入到血管内，菌体本身或者细菌释放的毒素等物质刺激中性粒细胞释放HBP从而导致血中HBP含量升高。HBP在一般感染时能达到20～30ng/mL，ICU中严重感染可能超过100ng/mL甚至高达1000ng/mL以上；当HBP含量超过1000ng/mL时病人已经处于极度危险中，面临着随时可能死亡的危险。正因为HBP有如此强大的作用，就很有必要对其在临床监测和治疗上应用进行大量研究。

目前，临床上将HBP≥15ng/mL作为严重败血症的标志，其敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别可以达到87.1％、95.1％、88.4％以及94.5％；在以上指标中，降钙素原水平、IL-6水平、乳铁蛋白水平、CRP水平、白细胞数量等指标可能在某一项表现突出，但其他项却很低，甚至低至30％左右。严重败血症往往导致循环衰竭的发生，因此，在发热病人中，血液HBP含量的高低是预测病人是否会发展为循环衰竭优选指标。

脓毒症是导致危重患者死亡的重要原因，且近年来其患病率仍在上升，早期诊断对于降低病死率，改善预后至关重要。众所周知，凝血功能紊乱、全身炎症反应失衡是造成脓毒症时器官功能障碍乃至衰竭的重要原因。研究表明，炎症反应早期，中性粒细胞趋化、游走、激活引起的病理生理过程是造成内皮细胞损伤的始动因素，据此推测，HBP可能在脓毒症的发生发展中起着重要作用。

HBP主要由中性粒细胞受刺激时释放入血，健康人血浆HBP浓度很低，一般不超过10ng/mL，脓毒性休克患者血浆HBP水平显著升高，HBP可以用于预测休克和循环衰竭的发生。Linder等认为血浆HBP水平大于15ng/mL是严重脓毒症诊断的最佳实验室指标，敏感性达87.1％，特异性95.1％，阳性预测值88.4％，阴性预测值94.5％。Akesson等发现脓毒症组血浆HBP水平明显高于对照组，动态检测HBP水平可辅助判断脓毒症转归，HBP水平与疾病严重程度有关，高HBP水平使患者死亡风险增加。脓毒症患者在出现血压降低前，HBP水平已升高，对338名严重脓毒症患者的调查研究发现，143名患者在发生器官衰竭前仅有HBP升高表现，其中80％血浆HBP浓度大于30ng/mL，平均在10.5h后出现器官衰竭。黄爱蓉等发现，HBP高于6.79ng/mL对预测脓毒症患儿的灵敏度、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别为84.21％、84.09％、69.57％和92.5％，联合检测HBP和剩余碱可提高特异度。对此，我们还需要更多的研究去验证其临床应用价值。

综上所述，HBP是中性粒细胞释放的一种颗粒蛋白，其产生释放机制还需要进一步研究。HBP作为临床新兴炎性标志物，具有高灵敏度及特异度的优点，如何将HBP与传统炎症标志物结合，以寻找更加快速、特异、灵敏的诊断脓毒症的指征，仍需要进一步探索研究。随着对HBP研究的深入，有理由相信HBP将会作为相当有价值的生物标志物在脓毒症的诊断中发挥更大的作用。