[发明专利]高感染滴度且高纯度的细小病毒的产生方法

摘要

本发明提供细小病毒的感染滴度为109TCID50/mL以上且前述细小病毒的感染滴度(TCID50/mL)与杂质蛋白质浓度(ng/mL)的比大于5000：1，来源于非浓缩的细胞培养上清的细小病毒及这样的高感染滴度且高纯度的细小病毒的产生方法。

主权项

1.一种高感染滴度且高纯度的细小病毒的产生方法，其包括如下工序：工序(a)，对于每个感染时细胞密度(A)，事先另行计算出宿主细胞感染细小病毒时的培养基材料的细胞密度每24小时的经时变化；工序(b)，基于在工序(a)中事先计算出的细胞密度的经时变化来确定：(b1)自感染起至细胞密度的经时变化的峰值时为止的时间(Tmax)、(b2)Tmax时的细胞密度(Bmax)与A满足以下的式(1)的A1、(b3)这样的A1中最大的感染时细胞密度(Amax)、及(b4)满足以下的式(2)的A2，Bmax/A1＞1.2    式(1)Amax≥A2≥Amax/10    式(2)；工序(c)，在包含A2的感染时细胞密度的宿主细胞和血清培养基的所述培养基材料中以感染复数(MOI)成为0.001～0.1的方式接种细小病毒的种病毒，所述A2是由工序(b)的(b4)中确定的；工序(d)，将工序(c)中得到的包含宿主细胞和细小病毒的培养物培养Tmax以上且少于Tmax+48小时的时间，所述Tmax是由工序(b)的(b1)中确定的；工序(e)，将工序(d)的培养上清更换为无血清培养基，培养12小时以上；以及工序(f)，对包含通过工序(e)的培养而得到的细小病毒的培养上清进行回收，所述工序(b)中，不存在满足式(1)的A的情况下，采用其它的感染时细胞密度A并再次实施工序(a)和工序(b)。