[发明专利]分析病毒来源治疗剂的方法有效
| 申请号： | 201680045182.1 | 申请日： | 2016-07-29 |
| 公开（公告）号： | CN108026567B | 公开（公告）日： | 2021-10-22 |
| 发明（设计）人： | T·L·布罗特;M·D·哈里奇;W·T·巴德;G·A·迈耶斯 | 申请（专利权）人： | 美国政府（由卫生和人类服务部的部长所代表）;美国国际生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6869;C12Q1/70 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 刘妍珺;马莉华 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | 本文描述了用于病毒来源治疗剂，例如病毒疫苗，包括PVS‑RIPO疫苗的大规模平行测序方法。该方法能够测定低频序列变体的微异质性并对其定量，在PVS‑RIPO的情况下，有望替代目前用于筛选多批RNA病毒来源治疗剂的猴神经毒力安全性试验(MNVT)以及通过PCR和限制性酶切割(MAPREC)法进行的突变体分析。 | ||
| 搜索关键词： | 分析 病毒 来源 治疗 方法 | ||
【主权项】：
1.一种测定病毒来源治疗剂中病毒序列变体的方法，包括：从主病毒库或工作细胞库提取核酸分子，其中主病毒库或工作细胞库包含含有病毒来源治疗剂的宿主细胞；将提取的核酸分子与DNA酶在基本上消化宿主细胞基因组DNA和宿主细胞线粒体DNA、但基本上不消化病毒核酸分子的条件下接触，由此产生富集的病毒核酸分子；如果富集的病毒核酸分子是RNA，则产生富含双链cDNA的病毒核酸分子，从而产生病毒双链DNA；扩增所述病毒双链DNA；定量所述病毒双链DNA；从至少500pg病毒双链DNA产生测序文库，其中所述测序文库包含与病毒双链DNA连接的5'-衔接子和3'-衔接子；使用下一代测序对测序文库进行测序,以产生包含多个序列读序的原始序列数据集；将所述多个序列读序与病毒来源治疗剂的参考序列进行比对，以产生包含多个匹配的序列读序的匹配序列；和从所述匹配序列确定病毒序列变体。
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