[发明专利]一种高灵敏度的BHV‑2实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒

摘要

一种高灵敏度的BHV‑2实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒。本发明提供了一种用于检测牛疱疹病毒2型的试剂盒和方法。所述的试剂盒包括用于检测牛疱疹病毒2型的引物组和荧光探针；所述的引物组由四条引物组成，用于巢氏扩增牛疱疹病毒2型的特定DNA片段。本发明提供的检测方法使得四条引物和一条荧光探针在一管中通过一步扩增即可完成巢氏扩增和实时荧光定量PCR，用于检测牛疱疹病毒2型。本发明提供了一种兼具高灵敏度、特异性、准确性的牛疱疹病毒2型实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒，能够实现对其快速检测，应用极为方便，基于上述优点，该试剂盒适合在畜牧养殖单位和动物检验检疫部门等进行推广应用，具有广泛的应用前景。

主权项

一种用于检测牛疱疹病毒2型的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括引物组和荧光探针；所述的引物组由引物BHV‑2‑ F1、引物BHV‑2‑R1、引物BHV‑2‑F2和引物BHV‑2‑R2组成；所述的引物BHV‑2‑F1的序列为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；所述的引物BHV‑2‑R1的序列为SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；所述的引物BHV‑2‑F2的序列为SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列；所述的引物BHV‑2‑R2的序列为SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列；所述的荧光探针为荧光探针BHV‑2‑P，荧光探针 BHV‑2‑P为TaqMan探针，所述的荧光探针BHV‑2‑P的核苷酸序列的5’端连接荧光基团FAM，3’ 端连接猝灭基团BHQ1；所述的荧光探针BHV‑2‑P的序列为SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列；所述的试剂盒的使用方法为：从待测样品中提取病毒DNA为模板，利用引物BHV‑2‑F1、引物BHV‑2‑R1、引物BHV‑2‑F2、 引物BHV‑2‑R2和荧光探针BHV‑2‑P，通过以下PCR扩增程序进行实时荧光定量PCR：94～96℃预变性2分钟；94～95℃变性15～30秒、65～69℃退火30～75 秒、68～72℃延伸30～40秒，6～9个循环；93～95℃变性15～20秒、60℃退火30秒、68～72℃ 延伸30秒，8个循环；93～95℃变性15秒、52~55℃退火延伸30~60秒，40个循环；55℃时收集荧光并判定结果。