[发明专利]一种高灵敏度的BHV‑2实时荧光定量PCR检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测牛疱疹病毒2型的试剂盒，其特征在于：

所述的试剂盒包括引物组和荧光探针；所述的引物组由引物BHV-2- F1、引物BHV-2-R1、引物BHV-2-F2和引物BHV-2-R2组成；

所述的引物BHV-2-F1的序列为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

所述的引物BHV-2-R1的序列为SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；

所述的引物BHV-2-F2的序列为SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列；

所述的引物BHV-2-R2的序列为SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列；

所述的荧光探针为荧光探针BHV-2-P，荧光探针 BHV-2-P为TaqMan探针，所述的荧光探针BHV-2-P的核苷酸序列的5’端连接荧光基团FAM，3’ 端连接猝灭基团BHQ1；

所述的荧光探针BHV-2-P的序列为SEQ ID NO.13所示的核苷酸序列；

所述的试剂盒的使用方法为：从待测样品中提取病毒DNA为模板，利用引物BHV-2-F1、引物BHV-2-R1、引物BHV-2-F2、 引物BHV-2-R2和荧光探针BHV-2-P，通过以下PCR扩增程序进行实时荧光定量PCR：

94～96℃预变性2分钟；94～95℃变性15～30秒、65～69℃退火30～75 秒、68～72℃延伸30～40秒，6～9个循环；93～95℃变性15～20秒、60℃退火30秒、68～72℃ 延伸30秒，8个循环；93～95℃变性15秒、52~55℃退火延伸30~60秒，40个循环；55℃时收集荧光并判定结果。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒还包括病毒DNA提取试剂、 DNA聚合酶、阳性质控品和阴性质控品。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述的阳性质控品为：

以牛疱疹病毒2型的基因组DNA为PCR模板，以权利要求1所述的引物BHV-2-F1和BHV-2- R1为PCR引物扩增得到的DNA片段，或含有该DNA片段的核酸片段或质粒；

所述的阴性质控品为RNase free H₂O。