[发明专利]一种中性粒细胞抗原底片的制备方法

摘要

本发明公开了一种中性粒细胞抗原底片的制备方法，包括以下步骤：将人的肝素抗凝血与的氯化钠溶液混合均匀，室温放置，吸取上层血浆；将上层血浆加入含有DextranT500的人淋巴细胞分离液中，充分混匀，离心，吸取沉淀在底部的白细胞层溶液，得到待离心溶液；将所述待离心溶液与LymphoprepTM分离液混合后，加入离心管中，将离心管置于水平式离心机内离心；吸取中性粒细胞层溶液，制备细胞悬浮液；将细胞悬浮液滴加在干净的载玻片上，自然风干，最后无水乙醇固定，得到中性粒细胞抗原底片。本发明的制备方法，解决了现有制备中性粒细胞抗原底片的方法中，存在中性粒细胞分布不均匀的问题，反应结果易观察。

主权项

1.一种中性粒细胞抗原底片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，将人的肝素抗凝血与0.5g/100g的氯化钠溶液按照4～6:1的体积比例混合均匀，室温放置，直至红细胞沉淀，吸取上层血浆，备用；步骤2，将上层血浆加入含有DextranT500的人淋巴细胞分离液中，充分混匀，然后室温、3000r/min离心10‑15min，吸取沉淀在底部的白细胞层溶液，得到待离心溶液；其中，每100mL人淋巴细胞分离液中添加1.5g的DextranT500；步骤3，将所述待离心溶液与LymphoprepTM分离液按1:3～5的体积比例混合后，加入离心管中，将离心管置于水平式离心机内，室温、1000‑2000r/min离心30‑35min；步骤4，吸取中性粒细胞层溶液，加入4℃预冷的缓冲液，4℃、1000r/min离心5‑10min，弃上清，收集细胞沉淀；所述缓冲液由以下方法制备而成：5g的氯化钠、3g的氯化钾，蒸馏水定容至1L；步骤5，向细胞沉淀中添加4℃预冷的0.8‑0.9g/100g氯化钠溶液，使细胞数为5～5.5×105个/mL，得到细胞悬浮液；步骤6，将细胞悬浮液滴加在干净的载玻片上，自然风干，最后滴加4℃预冷的无水乙醇，固定5‑8min，自然风干后得到中性粒细胞抗原底片。