[发明专利]一种蛋白质色谱分离平台及其应用

摘要

本发明涉及一种蛋白质色谱分离平台及其应用，所述的平台包括蛋白质组反应器(1)和与液相色谱‑质谱仪(2)；其中，蛋白质组反应器(1)包括移液枪枪头(3)、强阴离子交换树脂(4)和固相萃取膜(5)；固相萃取膜(5)填充于移液枪枪头(3)的下端，强阴离子交换树脂(4)填充于移液枪枪头(3)下端并位于固相萃取膜(5)之上。本发明提供的蛋白质色谱分离平台集成了蛋白质的预富集、还原、烷基化、酶解、多肽的强阴离子交换分级、高pH值反相分级和低pH值液相色谱分离等操作，具有一维分离、二维分离和三维分离三种工作模式，可用于少量细胞、组织或血液样品的蛋白质大规模鉴定和定量蛋白质组学中。

主权项

1.一种蛋白质色谱分离平台在细胞、组织或者血液样品的蛋白质鉴定和蛋白质定量分析中的应用，其特征在于，所述的蛋白质色谱分离平台包括蛋白质组反应器(1)与液相色谱‑质谱仪(2)；其中，所述蛋白质组反应器(1)包括移液枪枪头(3)、强阴离子交换树脂(4)和固相萃取膜(5)；固相萃取膜(5)填充于移液枪枪头(3)的下端，强阴离子交换树脂(4)填充于移液枪枪头(3)下端并位于固相萃取膜(5)之上；所述的蛋白质色谱分离平台的应用为：将生物样本中的蛋白质样品在强阴离子交换树脂上进行酶解和强阴离子交换分级，完成后将生成的多肽转移到固相萃取膜上进行高pH值反相分级，再将多肽转移到液相色谱‑质谱仪上进行低pH值液相色谱分离检测，实现三维分离，包括以下步骤：(1)细胞或者组织样品经裂解液裂解并碱化后，加到预先活化好的蛋白质组反应器中，通过离心使蛋白质富集到强阴离子交换树脂上；(2)使用含有机溶剂的溶液或者纯有机溶剂清洗掉结合到固相萃取膜上的表面活性剂，依次加入相应的试剂和酶，完成蛋白质的还原、烷基化和酶解；(3)使用不同pH值的溶液按pH值从高到低的顺序将生成的多肽从强阴离子交换树脂上依次转移到固相萃取膜上，进行强阴离子交换分级；(4)除盐后，使用高pH值的含有不同比例有机溶剂的溶液按从低到高的比例依次将多肽洗脱下来，进行高pH值反相分级；(5)使用液相色谱‑质谱仪对多肽样品进行低pH值液相色谱分离检测。