[发明专利]一种单质硒含量的测定方法

摘要

本发明公开了一种单质硒含量的测定方法。富硒蛋白多糖中加入XIV型蛋白酶，超声辅助酶解，将酶解液进行离心，所得到的沉淀在盐酸介质中，用双氧水在常温下进行氧化，所得到的四价硒在酸性条件下与2，3‑二氨基萘（DAN）反应生成苤硒脑络生物，用环己烷萃取；测定环己烷层荧光强度，从而计算出富硒蛋白多糖中单质硒的含量。对硒的测定避免使用了混合酸，同时大大减少了酸的用量；消化在常温下进行，可以避免强氧化还原性酸对实验室环境的污染，同时可防止硒的挥发损失，得到较高回收率；单质硒的消解时间短，约30分钟可以完成。

主权项

一种单质硒含量的测定方法，其特征是：常温下将待测样品中加入XIV型蛋白酶，超声辅助酶解，将酶解液进行离心，所得到的沉淀在HCl提供的酸性环境下利用双氧水氧化成为SeO32‑离子，其中的四价硒在微酸性pH 1.5～2.0条件下，与2，3‑二氨基萘（DAN）生成苤硒脑络生物，用环己烷萃取，用荧光光度计在激发波长为376 nm、发射波长为520 nm条件下测定荧光强度，从而计算出样品中的硒含量；所述的待测样品为富硒蛋白多糖；步骤如下：称取25 mg的富硒蛋白多糖于5 mL离心管中，加入3 mg XIV型蛋白酶，再加入3 mL的水，37℃超声30 min，然后离心30 min，转速设为10000 rpm/min，收集沉淀，并向沉淀中加入3 mL的水，混匀后10000 rpm/min离心30 min，离心结束后弃去上清，向得到的沉淀中加入100 uL浓度为6 mol/L的 HCL，再向其中加入3 mL H2O2常温下反应30 min，将上述反应后的反应液转移到容量瓶中，并用水定容至10 mL，再用水稀释6倍，从中取出2.0 mL加入至锥形瓶中，再加入30～40mL的水，调节pH至 1.5～2.0，接着加入3 mL EDTA 混合液摇匀，后加入3 mL DAN溶液，摇匀，置于沸水中保持5 min，取出冷却至室温，然后全部转移到125 mL分液漏斗中，加10 mL环己烷振荡2.0 min，静置分层后，用激发光波长376 nm、发射光波长520 nm 测定环己烷层的荧光强度，从而得到富硒蛋白多糖中单质硒含量。