[发明专利]一种活细胞内蛋白质棕榈酰化率的变化率的测定方法

摘要

本发明提供一种比较不同状态下的活细胞内蛋白质棕榈酰化率的测定方法，本发明将细胞培养稳定同位素标记技术和点击化学相结合，借助高分辨质谱仪，可实现活细胞中目标蛋白质棕榈酰化率(即棕榈酰化目标蛋白的量/总目标蛋白质的量)的精确测定，得到棕榈酰化率的变化率，能更准确地描述蛋白质棕榈酰化修饰的过程，更直观地判断与蛋白质棕榈酰化修饰相关的疾病的发生和发展，对于临床疾病的诊断和治疗具有明显的现实意义。

主权项

1.一种活细胞内蛋白质棕榈酰化率的变化率的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)用轻型同位素试剂标记第一状态活细胞内蛋白质，再用棕榈酸类试剂标记所述第一状态活细胞内棕榈酰化蛋白质，得到第一标记活细胞；用重型同位素试剂标记第二状态活细胞内蛋白质，再用棕榈酸类试剂标记所述第二状态活细胞内棕榈酰化蛋白质，得到第二标记活细胞；(2)将步骤(1)中第一、第二标记活细胞裂解并混合，对活细胞内总目标蛋白质进行质谱定性和质谱定量分析，得到式(1)的比值R1；将棕榈酰化蛋白质和未棕榈酰化蛋白质分离，并对棕榈酰化目标蛋白质经质谱定性和质谱定量分析，得到式(2)的比值R2；(3)由式(3)得到第一、第二状态下的活细胞内目标蛋白质棕榈酰化率的变化率R2/R1；计算公式如下：Ht/Lt＝R1(1)Hp/Lp＝R2(2)(Hp/Ht)/(Lp/Lt)＝R2/R1(3)其中，Hp、Lp分别代表重型同位素试剂和轻型同位素试剂标记的活细胞内棕榈酰化目标蛋白质的强度；Ht、Lt分别代表重型同位素试剂和轻型同位素试剂标记的活细胞内总目标蛋白质的强度；R1代表第二状态和第一状态下的活细胞内总目标蛋白质的强度之比；R2代表第二状态和第一状态下的活细胞内棕榈酰化目标蛋白质的强度之比；R2/R1代表第二状态和第一状态下的活细胞内目标蛋白质棕榈酰化率的变化率。