[发明专利]一种活细胞内蛋白质棕榈酰化率的变化率的测定方法

权利要求书

1.一种活细胞内蛋白质棕榈酰化率的变化率的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用轻型同位素试剂标记第一状态活细胞内蛋白质，再用棕榈酸类试剂标记所述第一状态活细胞内棕榈酰化蛋白质，得到第一标记活细胞；用重型同位素试剂标记第二状态活细胞内蛋白质，再用棕榈酸类试剂标记所述第二状态活细胞内棕榈酰化蛋白质，得到第二标记活细胞；

(2)将步骤(1)中第一、第二标记活细胞裂解并混合，对活细胞内总目标蛋白质进行质谱定性和质谱定量分析，得到式(1)的比值R1；将棕榈酰化蛋白质和未棕榈酰化蛋白质分离，并对棕榈酰化目标蛋白质经质谱定性和质谱定量分析，得到式(2)的比值R2；

(3)由式(3)得到第一、第二状态下的活细胞内目标蛋白质棕榈酰化率的变化率R2/R1；

计算公式如下：

Ht/Lt＝R1(1)

Hp/Lp＝R2(2)

(Hp/Ht)/(Lp/Lt)＝R2/R1(3)

其中，Hp、Lp分别代表重型同位素试剂和轻型同位素试剂标记的活细胞内棕榈酰化目标蛋白质的强度；Ht、Lt分别代表重型同位素试剂和轻型同位素试剂标记的活细胞内总目标蛋白质的强度；R1代表第二状态和第一状态下的活细胞内总目标蛋白质的强度之比；R2代表第二状态和第一状态下的活细胞内棕榈酰化目标蛋白质的强度之比；R2/R1代表第二状态和第一状态下的活细胞内目标蛋白质棕榈酰化率的变化率。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(1)中，所述同位素试剂为稳定同位素试剂。

3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于：所述稳定同位素试剂为含有稳定同位素的氨基酸。

4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(1)中，所述棕榈酸类试剂为17-十八炔酸。

5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(2)中，所述第一、第二标记活细胞裂解并等比例混合。

6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(2)中，在进行质谱定性和质谱定量分析前将蛋白质进行消化处理。

7.根据权利要求6所述的测定方法，其特征在于：将所述蛋白质进行胰酶消化处理。

8.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤(2)中，通过基于点击反应的亲和富集将棕榈酰化蛋白质和未棕榈酰化蛋白质分离。

9.根据权利要求8所述的测定方法，其特征在于：所述亲和富集使用的试剂为生物素标记的叠氮化合物和键合抗生物素蛋白的磁珠。

10.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：所述质谱定性和质谱定量分析为通过对轻型同位素和重型同位素分别标记的目标蛋白质中相同氨基酸序列的肽段丰度进行比较。