[发明专利]免疫亲和柱净化-超高效液相色谱-串联质谱检测鱼虾中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸的方法

摘要

本发明公开了一种免疫亲和柱净化‑超高效液相色谱‑串联质谱检测鱼虾中3‑甲基‑喹噁啉‑2‑羧酸的方法，匀质好的样品经2mol/L HCl溶液酸解后，将提取液pH调节至7～8，经过免疫亲和柱富集和净化后，采用LC‑MS/MS测定，外标法定量。以0.1％甲酸水溶液‑甲醇为流动相，梯度洗脱分离，电喷雾正离子多反应监测模式监测。本发明重现性好，灵敏度高，适合水产品中MQCA的实际测定。

主权项

1.一种免疫亲和柱净化-超高效液相色谱-串联质谱检测鱼虾中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)样品处理：称取匀质好的样品5g置于50mL具塞离心管中，加入10mL 2mol/L HCl溶液，涡旋振荡1min后置于气浴恒温振荡器中60℃恒温酸解30min，冷却至室温后，8000r/min离心5min，移取上清液至50mL离心管中，残渣中加入10mL 2mol/L HCl溶液重复提取一次，合并提取液并用水定容至25mL，混匀后用定量滤纸过滤，准确移取过滤后的提取液5mL先用4.0mol/L NaOH溶液，调pH至7～8，得样品液；/n(2)免疫亲和柱净化：取出免疫亲和柱，待回至室温后去掉免疫亲和柱堵头，放出柱内保存液，上样品液，以1滴/2s的速度过免疫亲和柱，上样结束后，先后用4mL PBS溶液和4mL水淋洗亲和柱，挤干柱内残留液，弃去以上全部流出液，用4mL 2％的乙酸-甲醇溶液洗脱目标物，洗脱液于50℃水浴氮气吹干，加入1mL初始流动相溶解残渣得净化液；/n(3)液相色谱-质谱分析：净化液经0.22μm滤膜过滤后供液相色谱-串联质谱仪测定获得3-甲基-喹噁啉-2-羧酸的峰面积，将峰面积代入标准曲线分析计算，从而获得样品中3-甲基-喹噁啉-2-羧酸的含量；/n色谱条件为：色谱柱：Waters Acquity UPLC BEH C18柱，规格：50mm×2.1mm，1.7μm；进样量10μL；样品室温度10℃，柱温40℃；流动相：A为体积百分比浓度为0.1％甲酸溶液，B为甲醇，梯度洗脱程序如下：0～3min，90％～10％A；3～4min，10％～90％A；4～5min，A保持90％不变；流速：0.3mL/min；/n质谱条件为：电喷雾离子源；正离子扫描模式；多反应监测检测方式；毛细管电压：3.5kV；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：380℃；锥孔气为高纯氮气，流量：50L/h；脱溶剂气为高纯氮气，流量：600L/h，母离子为188.9，子离子为142.9、144.9。/n