[发明专利]基于纳米模拟酶的可视化快速检测生物酶、蛋白质及其抑制剂的方法

摘要

本发明公开了一种含有纳米模拟酶的检测试剂。本发明还公开了基于纳米模拟酶技术对生物酶或者蛋白质及其抑制剂活性的可视化检测方法。该方法基于某些能够模拟天然氧化酶的纳米材料对许多显色剂的氧化反应呈现出良好的pH依赖性，以及许多天然酶或者蛋白质在发生生物催化的过程中能够释放/消耗H⁺的特性，利用反应体系pH的原位变化，影响该纳米材料的催化氧化能力，从而使检测试剂产生不同程度颜色变化，实现对生物酶或者蛋白质活性的可视化检测，并进而实现其对应抑制剂的可视化检测。本发明检测方法所输出的物理信号对待测体系中生物酶/蛋白质活性在一定浓度范围内呈现非常好的线性关系，从而实现对待测目标的高灵敏检测。

主权项

1.一种非治疗诊断目的的基于纳米模拟酶的可视化快速检测生物酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）纳米模拟酶的制备：利用湿法化学制备纳米氧化铈，经分离、纯化并测定其浓度后备用；2）检测试剂缓冲液的制备：配制pH分别为7.0或4.5，浓度为5 mM 的磷酸缓冲溶液待用；3）检测生物酶活性的检测试剂的制备：取一定量的3,3,5,5‑四甲基联苯胺、ATP以及待测生物酶的反应底物乙酰胆碱溶液或尿素溶液加入到配制好的磷酸缓冲溶液中，混合均匀后待用；4）生物酶活性的可视化检测：将上述检测试剂与含有待测检测生物酶的样品以及一定量的所述纳米模拟酶混合后在37℃下孵育反应，然后根据检测试剂颜色的变化或通过肉眼观察对待测生物酶的活性进行半定量的判断；或通过相应的仪器对待测生物酶的活性进行精确的测定和定量；其中，所述生物酶为乙酰胆碱酯酶和脲酶中的一种，当所述生物酶为乙酰胆碱酯酶时，所述反应底物为乙酰胆碱溶液，所述检测试剂缓冲液的pH为7.0；当所述生物酶为脲酶时，所述反应底物为尿素溶液，所述检测试剂缓冲液的pH为4.5。