[发明专利]牙周炎致病菌多重荧光PCR检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种牙周炎致病菌多重荧光PCR检测试剂盒，对10种牙周炎主要致病菌：伴放线杆菌、牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、齿垢密螺旋体、福赛斯坦纳菌、具核梭杆菌属、纤细弯曲杆菌、直肠弯曲菌、纠缠真杆菌以及星座链球菌进行检测，可以对样品采集、核酸提取、PCR扩增等试验过程进行全程质量控制，并且快速的得到检测结果。这种牙周炎致病菌多重荧光PCR检测试剂盒可以用于快速检测牙周炎主要致病菌。

主权项

1.一种牙周炎致病菌多重荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，包括第一预分装PCR反应液、第二预分装PCR反应液、第三预分装PCR反应液、酶以及PCR缓冲液；所述第一预分装PCR反应液包括人核糖核酸酶P基因探针、细菌16SrDNA基因探针、伴放线杆菌探针、牙龈卟啉单胞菌探针、第一正向引物、第一反向引物、第二正向引物、第二反向引物、第三正向引物、第三反向引物、第四正向引物以及第四反向引物，所述第一正向引物和所述第一反向引物用于扩增人核糖核酸酶P基因的目的片段，所述第二正向引物和所述第二反向引物用于扩增细菌16SrDNA基因的目的片段，所述第三正向引物和所述第三反向引物用于扩增伴放线杆菌的目的片段，所述第四正向引物和所述第四反向引物用于扩增牙龈卟啉单胞菌的目的片段，所述人核糖核酸酶P基因探针、所述细菌16SrDNA基因探针、所述伴放线杆菌探针和所述牙龈卟啉单胞菌探针分别采用不同的荧光标记物标记；所述第二预分装PCR反应液包括中间普氏菌探针、齿垢密螺旋体探针、福赛斯坦纳菌探针、具核梭杆菌属探针、第五正向引物、第五反向引物、第六正向引物、第六反向引物、第七正向引物、第七反向引物、第八正向引物以及第八反向引物，所述第五正向引物和所述第五反向引物用于扩增中间普氏菌的目的片段，所述第六正向引物和所述第六反向引物用于扩增齿垢密螺旋体的目的片段，所述第七正向引物和所述第七反向引物用于扩增福赛斯坦纳菌的目的片段，所述第八正向引物和所述第八反向引物用于扩增具核梭杆菌的目的片段，所述中间普氏菌探针、所述齿垢密螺旋体探针、所述福赛斯坦纳菌探针和所述具核梭杆菌属探针分别采用不同的荧光标记物标记；所述第三预分装PCR反应液包括纤细弯曲杆菌探针、直肠弯曲菌探针、纠缠真杆菌探针、星座链球菌探针、第九正向引物、第九反向引物、第十正向引物、第十反向引物、第十一正向引物、第十一反向引物、第十二正向引物以及第十二反向引物，所述第九正向引物和所述第九反向引物用于扩增纤细弯曲杆菌的目的片段，所述第十正向引物和所述第十反向引物用于扩增直肠弯曲菌的目的片段，所述第十一正向引物和所述第十一反向引物用于扩增纠缠真杆菌的目的片段，所述第十二正向引物和所述第十二反向引物用于扩增星座链球菌的目的片段，所述纤细弯曲杆菌探针、所述直肠弯曲菌探针、所述纠缠真杆菌探针和所述星座链球菌探针分别采用不同的荧光标记物标记；所述人核糖核酸酶P基因探针、所述细菌16SrDNA基因探针、所述伴放线杆菌探针、所述牙龈卟啉单胞菌探针、所述中间普氏菌探针、所述齿垢密螺旋体探针、所述福赛斯坦纳菌探针、所述具核梭杆菌属探针、所述纤细弯曲杆菌探针、所述直肠弯曲菌探针、所述纠缠真杆菌探针以及所述星座链球菌探针均为TaqMan探针；所述人核糖核酸酶P基因探针的序列如SEQ ID No.13所示，所述细菌16SrDNA基因探针的序列如SEQ ID No.14所示，所述伴放线杆菌探针的序列如SEQ ID No.15所示，所述牙龈卟啉单胞菌探针的序列如SEQ ID No.16所示；所述中间普氏菌探针的序列如SEQ ID No.17所示，所述齿垢密螺旋体探针的序列如SEQ ID No.18所示，所述福赛斯坦纳菌探针的序列如SEQ ID No.19所示，所述具核梭杆菌属探针的序列如SEQ ID No.20所示；所述纤细弯曲杆菌探针的序列如SEQ ID No.21所示，所述直肠弯曲菌探针的序列如SEQ ID No.22所示，所述纠缠真杆菌探针的序列如SEQ ID No.23所示，所述星座链球菌探针的序列如SEQ ID No.24所示；所述第一正向引物的序列如SEQ ID No.25所示，所述第一反向引物的序列如SEQ IDNo.26所示，所述第二正向引物的序列如SEQ ID No.27所示，所述第二反向引物的序列如SEQ ID No.28所示，所述第三正向引物的序列如SEQ ID No.29所示，所述第三反向引物的序列如SEQ ID No.30所示，所述第四正向引物的序列如SEQ ID No.31所示，所述第四反向引物的序列如SEQ ID No.32所示，所述第五正向引物的序列如SEQ ID No.33所示，所述第五反向引物的序列如SEQ ID No.34所示，所述第六正向引物的序列如SEQ ID No.35所示，所述第六反向引物的序列如SEQ ID No.36所示，所述第七正向引物的序列如SEQ ID No.37所示，所述第七反向引物的序列如SEQ ID No.38所示，所述第八正向引物的序列如SEQ IDNo.39所示，所述第八反向引物的序列如SEQ ID No.40所示，所述第九正向引物的序列如SEQ ID No.41所示，所述第九反向引物的序列如SEQ ID No.42所示，所述第十正向引物的序列如SEQ ID No.43所示，所述第十反向引物的序列如SEQ ID No.44所示，所述第十一正向引物的序列如SEQ ID No.45所示，所述第十一反向引物的序列如SEQ ID No.46所示，所述第十二正向引物的序列如SEQ ID No.47所示，所述第十二反向引物的序列如SEQ IDNo.48所示。