[发明专利]牙周炎致病菌多重荧光PCR检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种牙周炎致病菌多重荧光PCR检测试剂盒，对10种牙周炎主要致病菌：伴放线杆菌、牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、齿垢密螺旋体、福赛斯坦纳菌、具核梭杆菌属、纤细弯曲杆菌、直肠弯曲菌、纠缠真杆菌以及星座链球菌进行检测，可以对样品采集、核酸提取、PCR扩增等试验过程进行全程质量控制，并且快速的得到检测结果。这种牙周炎致病菌多重荧光PCR检测试剂盒可以用于快速检测牙周炎主要致病菌。

技术领域

本发明涉及一种牙周炎致病菌多重荧光PCR检测试剂盒。

背景技术

牙周炎是以牙龈红肿、出血、溢脓、龈肉萎缩、牙龈外漏、牙齿松动为特征的多因素疾病，是人类口腔中常见疾病之一。全国口腔健康流行病调查发现，牙周炎疾病具有多发性和普遍性的特点，全国牙周炎患者医院就诊约在2000万人/年；美国进行的流行病学研究估计，超过400万以上的美国人患有牙周炎疾病。牙周炎是多种危险因素和易感因素综合作用的结果，它们错综复杂、相互影响。危险因素如环境、行为和微生物等因素，它们直接增大了疾病发生的可能性。大量研究发现细菌是牙周病发生发展的始动因子，包括伴放线杆菌、牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、福赛斯坦纳菌、粪肠球菌、具核梭杆菌、齿垢密螺旋体等。

目前，市场上尚未出现针对牙周炎致病菌检测的试剂盒。

发明内容

基于此，有必要提供一种用于快速检测牙周炎致病菌的牙周炎致病菌多重荧光PCR检测试剂盒。

一种牙周炎致病菌多重荧光PCR检测试剂盒，包括第一预分装PCR反应液、第二预分装PCR反应液、第三预分装PCR反应液、酶以及PCR缓冲液；

所述第一预分装PCR反应液包括人核糖核酸酶P基因探针、细菌16SrDNA基因探针、伴放线杆菌探针、牙龈卟啉单胞菌探针、第一正向引物、第一反向引物、第二正向引物、第二反向引物、第三正向引物、第三反向引物、第四正向引物以及第四反向引物，所述第一正向引物和所述第一反向引物用于扩增人核糖核酸酶P基因的目的片段，所述第二正向引物和所述第二反向引物用于扩增细菌16SrDNA基因的目的片段，所述第三正向引物和所述第三反向引物用于扩增伴放线杆菌的目的片段，所述第四正向引物和所述第四反向引物用于扩增牙龈卟啉单胞菌的目的片段，所述人核糖核酸酶P基因探针、所述细菌16SrDNA基因探针、所述伴放线杆菌探针和所述牙龈卟啉单胞菌探针分别采用不同的荧光标记物标记；

所述第二预分装PCR反应液包括中间普氏菌探针、齿垢密螺旋体探针、福赛斯坦纳菌探针、具核梭杆菌属探针、第五正向引物、第五反向引物、第六正向引物、第六反向引物、第七正向引物、第七反向引物、第八正向引物以及第八反向引物，所述第五正向引物和所述第五反向引物用于扩增中间普氏菌的目的片段，所述第六正向引物和所述第六反向引物用于扩增齿垢密螺旋体的目的片段，所述第七正向引物和所述第七反向引物用于扩增福赛斯坦纳菌的目的片段，所述第八正向引物和所述第八反向引物用于扩增具核梭杆菌的目的片段，所述中间普氏菌探针、所述齿垢密螺旋体探针、所述福赛斯坦纳菌探针和所述具核梭杆菌属探针分别采用不同的荧光标记物标记；

所述第三预分装PCR反应液包括纤细弯曲杆菌探针、直肠弯曲菌探针、纠缠真杆菌探针、星座链球菌探针、第九正向引物、第九反向引物、第十正向引物、第十反向引物、第十一正向引物、第十一反向引物、第十二正向引物以及第十二反向引物，所述第九正向引物和所述第九反向引物用于扩增纤细弯曲杆菌的目的片段，所述第十正向引物和所述第十反向引物用于扩增直肠弯曲菌的目的片段，所述第十一正向引物和所述第十一反向引物用于扩增纠缠真杆菌的目的片段，所述第十二正向引物和所述第十二反向引物用于扩增星座链球菌的目的片段，所述纤细弯曲杆菌探针、所述直肠弯曲菌探针、所述纠缠真杆菌探针和所述星座链球菌探针分别采用不同的荧光标记物标记。