[发明专利]紫甘蓝花色苷单体的分离纯化方法

摘要

本发明涉及有机物分离纯化领域，具体而言，涉及一种紫甘蓝花色苷单体的分离纯化方法，所述方法包括以下步骤：1)、用酸化乙醇对破碎后的紫甘蓝进行抽提得到花色苷粗提液；将所述花色苷粗提液旋蒸除去乙醇后过树脂柱吸附，经洗柱后再次旋蒸得到花色苷膏状物，常温放置干燥后得到花色苷粗上样粉末；2)、使用高速逆流色谱技术对所述花色苷粗上样粉末进一步分离纯化；3)、收集步骤2)得到的纯化好的花色苷组份并采用HPLC‑MS进行定性分析，对纯度大于90％的花色苷单体于旋转蒸发仪上依次经减压浓缩、真空冷冻干燥至恒重，即得花色苷单体成品。

主权项

1.一种紫甘蓝花色苷单体矢车菊‑3‑芥子酰二葡萄糖基‑5葡萄糖苷以及矢车菊‑3‑咖啡酰芥子酰二葡萄糖基‑5葡萄糖苷的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：1）、取紫甘蓝切丝后用榨汁机打碎；按照1g：3mL的料液比加入提取溶剂酸化乙醇，于4℃下避光搅拌12h，抽滤得到花色苷粗提液；35℃下旋蒸除去乙醇，得到浓缩液放在4℃冷库中备用；按体积份数计，所述酸化乙醇包括：乙醇37.5份、水62份以及三氟乙酸0.5份；2）、用超纯水浸泡XAD‑7树脂24h使其充分溶胀，湿法装入内玻璃层析柱中，用0.1mol/L的HCl冲洗10倍柱体积对树脂进行活化，随后用含0.5%三氟乙酸的超纯水冲洗树脂至不含HCl为止；在4℃的层析柜中以3mL/min的流速上步骤1）所得粗提液；以相同的流速用含0.5%三氟乙酸的超纯水冲洗10倍柱体积以除去杂质后用含0.5%三氟乙酸的甲醇溶液洗脱，采用自动收集器收集，每2min收集一管，并在520nm处分别测定其吸光值；随后将所收集洗脱液后用旋转蒸发仪在35℃下除去混合物中的甲醇得到膏状物，常温放置一晚得花色苷粗上样粉末；3）、逆流色谱溶剂体系准备：溶剂体系为甲基叔丁基醚、正丁醇、乙腈以及含三氟乙酸0.03%的酸化水；按体积份数计，其中甲基叔丁基醚含量21份、正丁醇18份、乙腈21份以及酸化水30份；将按照固定配比混匀的试剂配置好后放入试剂瓶中，充分混匀后倒入分液漏斗中，室温静置待两相平衡后；将两相溶剂的上下相分开，分别置于试剂瓶中，超声脱气20 min，静置后备用；4）、取步骤3）所配置溶剂体系的上相作为固定相，下相作为流动相；开启循环水浴，开启泵，以20mL/min流速将已脱气好的固定相从主机管路进口处泵入，至管路内全部注满固定相，待体系平衡后；以2mL/min从进柱口泵入流动相；设置流路切换六通阀、主机设置为正向旋转，转速为600r/min，待主机的转速达到所需的转速，并平稳旋转，当出口端流出流动相稳定时，快速将调节旋钮到关闭阀，将样品注射入装样注射器中再将调节旋钮调节到进样阀，然后将紫外检测器、工作站获取状态、调零开始采集数据，根据峰形手动接收组分；收集到的各管采用HPLC‑MS进行花色苷定性分析，对纯度大于90%的花色苷单体于旋转蒸发仪上依次经减压浓缩、真空冷冻干燥至恒重，即得酰基化花色苷单体成品矢车菊‑3‑芥子酰二葡萄糖基‑5葡萄糖苷以及矢车菊‑3‑咖啡酰芥子酰二葡萄糖基‑5葡萄糖苷。