[发明专利]紫甘蓝花色苷单体的分离纯化方法

说明书

本发明涉及有机物分离纯化领域，具体而言，涉及一种紫甘蓝花色苷单体的分离纯化方法，所述方法包括以下步骤：1)、用酸化乙醇对破碎后的紫甘蓝进行抽提得到花色苷粗提液；将所述花色苷粗提液旋蒸除去乙醇后过树脂柱吸附，经洗柱后再次旋蒸得到花色苷膏状物，常温放置干燥后得到花色苷粗上样粉末；2)、使用高速逆流色谱技术对所述花色苷粗上样粉末进一步分离纯化；3)、收集步骤2)得到的纯化好的花色苷组份并采用HPLC‑MS进行定性分析，对纯度大于90％的花色苷单体于旋转蒸发仪上依次经减压浓缩、真空冷冻干燥至恒重，即得花色苷单体成品。

技术领域

本发明涉及有机物分离纯化领域，具体而言，涉及一种紫甘蓝花色苷单体的分离纯化方法。

背景技术

紫甘蓝(Brassica oleracea var.capitata f.rubra)，又称紫洋白菜、红甘蓝、紫椰菜、赤球甘蓝，是结球甘蓝(洋白菜)的变型，属十字花科、芸薹属、甘蓝种，是结球甘蓝的一个变种。它最早起源于地中海以及欧洲西部和南部地区，目前在世界各地均有种植。已报到的紫甘蓝花色苷因品种差异，其花色苷种类从十余种到几十余种不等，紫甘蓝花色苷和水果中的花色苷不同，主要是酰基化的花色苷。

花色苷属于多酚类化合物，是一类重要的植物化学成分。花色苷分布于鲜花、水果、蔬菜和谷类豆类等植物中，已报到的花色苷有500余种。花色苷具有一定的生理活性，如改善视觉功能、改善大脑功能、抗肥胖症、抗糖尿病、抗心血管疾病和抗癌症等。

目前，对花色苷的生理活性研究均采用花色苷单体、提取物或富含花色苷的食品在人、动物和细胞三大体系进行实验。而市售花色苷单体仅为30余种，其总量不足已报到花色苷单体总量的1％，且均为非酰基化花色苷。商品化花色苷单体种类不足极大地制约了花色苷生理功能和作用机理的相关研究，因此开展分离纯化花色苷单体，特别是酰基化花色苷单体的工作极具重要的意义。

高速逆流色谱法是20世纪80年代初，由美国国立健康研究院的Ito和Bowman在液液分配色谱的基础上研究和发展起来的一种现代色谱分离制备技术。与传统的液－固色谱相比，它的固定相和流动相都是液体，不需要固体支撑，避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等弊端。且被分离物质与液态固定相之间能可充分接触，使得样品的制备量大大提高。高速逆流色谱法具有连续、高效、制备量大等优点，在天然产物分离纯化领域应用较为广泛。虽然高速逆流色谱法有以上优点，但其在花色苷提取领域却鲜有应用。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供紫甘蓝花色苷单体的分离纯化方法，以解决上述问题。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种紫甘蓝花色苷单体的分离纯化方法，包括以下步骤：

1)、用酸化乙醇对破碎后的紫甘蓝进行抽提得到花色苷粗提液；将所述花色苷粗提液旋蒸除去乙醇后过树脂柱吸附，经洗柱后再次旋蒸得到花色苷膏状物，常温放置干燥后得到花色苷粗上样粉末；

2)、使用高速逆流色谱技术对所述花色苷粗上样粉末进一步分离纯化；

3)、收集步骤2)得到的纯化好的花色苷组份并采用HPLC-MS进行定性分析，对纯度大于90％的花色苷单体于旋转蒸发仪上依次经减压浓缩、真空冷冻干燥至恒重，即得花色苷单体成品。

高速逆流色谱技术(High-speed Countercurrent Chromatography，简称HSCCC)是基于样品在逆行的互不混溶两相溶剂之间分配系数的差异而实现分离的新型分离技术，它的固定相和流动相都是液体，没有不可逆吸附，具有样品无损失、无污染、高效、快速和大制备量分离等优点。它相对于传统的固-液柱色谱技术，具有适用范围广、操作灵活、高效、快速、制备量大、费用低等优点。