[发明专利]基于分子印记纳米磁珠与质谱联用用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢物质群的检测方法

摘要

本发明公开了一种基于分子印记纳米磁珠与LTQ‑Orbitrap‑MS技术联用用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢物质群的分析方法。该方法依次经过制备印记磁珠，样品处理，样品分析。本发明所采用的分子印记与LTQ‑Orbitrap‑MS联用分析方法针对生物样品基质复杂的作用特点，通过富集代谢物质群，结合活性筛选，追溯中药原形成分，揭示中药三七“原形成分‑代谢物质群‑活性”的相关性，为阐明体内外药效物质关系和发现潜在先导化合物提供研究思路，有望广泛应用于中药活性代谢物质群的发现及药效物质基础研究。

主权项

一种基于分子印记纳米磁珠与LTQ‑Orbitrap‑MS技术联用用于大鼠粪便中三七总皂苷代谢物质群的分析方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)制备印记磁珠：将Fe3O4@SiO2纳米粒分散于致孔剂中，加入功能单体，交联剂，引发剂，模板分子人参皂苷Rb1，搅拌，室温聚合20h，再用乙酸和甲醇混合溶液洗去模板分子，真空干燥；(2)样品处理：大鼠给药三七总皂苷水溶液后，分别于4,8,12,16,20,24,36,72小时的时间点取粪便样品，将每份样品取出相同的量制成混合粪便，随后混合粪便样品处理如下：将混合粪便加入样品重3倍的预处理溶剂涡旋、离心后，取上清液，氮气吹干，预处理溶剂复溶，加入印记磁珠进行吸附解析；(3)样品分析：利用LTQ‑Orbitrap‑MS分析仪对解析液进行分析，鉴定三七总皂苷的代谢物质群；高效液相条件：流动相A：0.2％甲酸水溶液；流动相B：甲醇；梯度条件：0–2min5％B；2–10min 5％‑50％B；11–15 50％‑95％B and；18–18.1 95％‑5％B；18.1–23min 5％A；流速：0.3ml/min；柱温：35℃；质谱条件：N2流速：10.0l/min；N2温度：320℃；辅助离子加热：60℃；毛细管电压：3500V；碰撞能：55V。