[发明专利]利用重组大肠杆菌以甘油为碳源发酵生产琥珀酸的方法有效
| 申请号： | 201610305322.6 | 申请日： | 2016-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN105779513B | 公开（公告）日： | 2019-12-06 |
| 发明（设计）人： | 叶勤;李晴;李志敏;吴辉 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学 |
| 主分类号： | C12P7/46 | 分类号： | C12P7/46;C12R1/19 |
| 代理公司： | 31218 上海翼胜专利商标事务所(普通合伙) | 代理人： | 翟羽<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开一种利用重组大肠杆菌以甘油为碳源发酵生产琥珀酸的方法，在特定条件下增殖具有高效转化甘油能力的重组大肠杆菌达到高密度，然后在厌氧条件下快速将甘油转化为琥珀酸，所述特定条件是指培养基同时含有甘油和乙酸或其盐作为碳源，发酵初始阶段采用常规有氧培养，维持溶氧水平在10％以上，在菌体达到足够浓度后进入诱导阶段，加入IPTG诱导磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的表达，并限制氧的供应，保持整个诱导阶段溶氧不高于1％。本发明的优点在于：甘油作为生物柴油的副产物，其价格低廉，合成琥珀酸所需的还原力足够，且本发明提供的方法发酵时间短，琥珀酸得率高，具有积极的工业应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 重组 大肠杆菌 甘油 碳源 发酵 生产 琥珀酸 方法 | ||
【主权项】：
1.一种利用重组大肠杆菌以甘油为碳源发酵生产琥珀酸的方法，其特征在于，所述方法是指在特定条件下增殖具有高效转化甘油能力的重组大肠杆菌达到高密度，然后在厌氧条件下快速将甘油转化为琥珀酸，所述特定条件是指培养基同时含有甘油和乙酸或其盐作为碳源，所述甘油在总碳源中质量比为60％-80％，发酵初始阶段采用常规有氧培养，维持溶氧水平在10％以上，在菌体达到足够浓度后进入诱导阶段，加入IPTG诱导磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶的表达，并限制氧的供应，保持整个诱导阶段溶氧不高于1％；所述重组大肠杆菌是以野生型大肠杆菌MG1655作为出发菌株，采用RED重组技术阻断其琥珀酸生产的竞争性途径乳酸脱氢酶(ldhA)和丙酮酸甲酸裂解酶(pflB)获得工程菌，将大肠杆菌的磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶基因(pck)克隆并连接到pTrc99a上，构建质粒pTrc99a-pck，将此质粒转化入上述乳酸脱氢酶(ldhA)和丙酮酸甲酸裂解酶(pflB)缺失的基因工程菌。/n
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