[发明专利]一种卫矛茎段不定芽诱导方法

摘要

本发明提供一种卫矛茎段不定芽诱导方法，其包括以下步骤选取具有3‑5个节间长、势良好的当年生枝条，剪去叶片的茎段；用洗衣粉水和流水将茎段清洗干净；将外植体于超净工作台上采用紫外灯照射、75%酒精、吐温结合升汞等系列灭菌方法；将茎段基部朝下，竖直插入培养基中；培养温度24±1℃，湿度50－60%，光周期16h光照，光照强度2000－3000lx；生长状况记录。本发明以卫矛茎段为外植体，成功建立了卫矛茎段无菌体系，成功诱导出不定芽，且不定芽诱导率达到70.67%，每个外植体平均芽数达5.6个，在随后增殖过程中的增殖系数达到了23.51，平均芽长1.28cm。这种生产周期短，繁殖系数高。

主权项

一种卫矛茎段不定芽诱导方法，其特征在于按如下步骤进行：（1）、外植体的选取：选取在野外健康生长的卫矛植株，于5月中旬晴天午后14:00时左右，从2‑3年生的植株上选取具有3‑5个节间、长势良好的当年生枝条若干，置于自封袋内带回实验室；（2）、外植体预处理：（a）将采取的枝条剪去叶片，并剪成2cm的茎段；（b）将剪好的茎段置于烧杯中，并蒙上纱布放在流水下，以最大水流冲洗，以去除表面脏物；（c）将冲洗过的茎段放于洗衣粉水中浸泡，期间用毛笔不断刷洗茎段的腋芽处，进行深层清理；（d）将洗衣粉水中的茎段捞出转到另一烧杯中，蒙上纱布置于流水下冲洗，再用干净滤纸将茎段表面水分吸干，移至超净工作台备用；（3）、外植体灭菌处理： （a）移到超净工作台的茎段，平铺在灭菌后的滤纸上，先用紫外灯照射5min，再将茎段用镊子翻转过来，继续照射5min，在紫外线照射期间将工作台的风机打开；（b）将茎段倒于无菌瓶中，先用75%酒精灭菌处理30s，期间不断用无菌镊子搅拌，之后用无菌水漂洗3次，转移至新的无菌瓶中；（c）两滴吐温‑20结合0.1%升汞共同作用8min，期间不断用无菌镊子搅拌，之后用无菌水漂洗5次，准备接种；（4）、外植体接种：将茎段放在无菌培养皿的无菌滤纸上，用无菌的手术刀和镊子，把茎段两端切掉少许，插入培养基中；将诱导出来的不定芽切分成单个芽，再将单芽接种在增殖培养基中进行增殖培养；（5）、培养条件: 培养温度24±1℃，湿度50－60%，光照时间为16h/d，光照强度2000－3000lx，培养周期60天；（6）、生长状况：（a）诱导培养：于MS+6‑BA2.0mg/L+NAA0.05mg/L培养基上，诱导10天后，在茎段中上部观察到有浅绿色愈伤组织；20天后，愈伤组织逐渐变为黄褐色；培养40天后，产生深褐色愈伤组织，并有不定芽形成；培养至60天，不定芽诱导率达70.67%，每个外植体平均芽数达5.6个；（b）增殖培养：于MS+NAA 0.05mg/L+6‑BA 1.0mg/L或MS+NAA 0.05mg/L+6‑BA0.5mg/L培养基上，可以诱导单个不定芽增殖，在培养10天后，单芽基部变为白色并开始分化形成多个小芽，随后不定芽继续增殖和伸长，在60天时，MS+NAA 0.05mg/L+6‑BA0.5mg/L培养基上增殖系数达到19.25，MS+NAA 0.05mg/L+6‑BA 1.0mg/L培养基上增殖系数高达23.51，平均芽长1.28cm。