[发明专利]一种卫矛茎段不定芽诱导方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种植物组织培养技术方法，特别涉及一种卫矛茎段不定芽诱导方法。

背景技术

卫矛(Euonymus alatus (Thunb.) Sieb.)是卫矛科(Celastracea)卫矛属(Euonymus L.)落叶灌木，又名鬼箭羽、见肿消、千层皮等。其株形密集，秋叶紫红色，假种皮橘红色，极具观赏价值，为重要的野生观叶观果的灌丛。同时，卫矛根、皮均可入药，具有破血、杀虫、通经、散疲止痛等功效和调血脂、降血糖、延缓动脉粥样硬化等作用，近年来我国临床上用于治疗糖尿病已取得显著效果，卫矛在韩国和日本也多用于对抗肿瘤，具有很好的药用价值。

中国除新疆、青海、西藏、广东及海南以外，各地均有分布，但都是在野外自然条件下生长，种植却不普遍。虽然现如今卫矛已在欧洲普遍栽培，但是引进成本高，驯化困难，因此我国需研究出这个集观赏价值与经济价值为一体的乡土树种------卫矛的培育技术。然而由于卫矛种子具有假种皮，种子内含油量高，休眠期长，生产中获得卫矛实生苗难度大。传统的扦插、嫁接等无性繁殖技术，繁殖系数低，速度慢，品质易退化，且操作比较困难，无法规模化生产，很难满足当今市场的需求。

组织培养是植物离体快繁的重要实验技术，在很多苗木生产中得到推广和应用，基本步骤包括外植体的选取、处理、灭菌、诱导培养、增殖培养、生根培养、炼苗、移栽等一系列过程。实验步骤并不繁复，但要诱导出大量不定芽，进而获得丛生苗，每一个步骤的操作都非常重要，尤其是培养基的筛选。不同植物、同一植物的不同组织器官，对激素的作用浓度以及基本培养基的种类有很大差异，需要进行大量的摸索和改进。而卫矛茎段诱导不定芽发生技术至今并没有报道。

综上所述，如果能找到卫矛茎段诱导不定芽发生的技术方法，为卫矛快繁体系建立提供理论依据和技术支撑，对推动卫矛工厂化育苗及普遍栽植的实现具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于针对卫矛引进成本高，传统繁殖方法困难，且繁殖系数低，工作量大等问题，基于组织培养技术，找到一种简单可行的卫矛不定芽获得方法，为后续的卫矛离体快繁体系的建立以及卫矛种苗的大量生产和供应提供技术支持。

本发明技术方案如下：

1、外植体的选取：

选取在野外健康生长的卫矛植株，于5月中旬晴天午后14:00时左右，从2-3年生的植株上选取具有3-5个节间、长势良好的当年生枝条若干，置于自封袋内带回实验室。

2、外植体预处理：

（1）将采取的枝条剪去叶片，并剪成2cm的茎段；

（2）将剪好的茎段放在流水下冲洗10min，去除表面脏物；

（3）将处理好的茎段放于洗衣粉水中浸泡30min，期间用毛笔不断刷洗茎段的腋芽处，进行深层清理；

（4）置于流水下冲洗2h，用干净滤纸吸干水分，移至超净工作台备用。

3、外植体灭菌处理：

（1）移到超净工作台的茎段，先用紫外灯照射10min；

（2）将茎段倒于无菌瓶中，先用75%酒精灭菌30s，期间不断用无菌镊子搅拌，之后用无菌水漂洗3次，转移至新的无菌瓶中；

（3）在0.1%升汞中加入两滴吐温-20，再一同作用灭菌8min，期间不断用无菌镊子搅拌，之后用无菌水漂洗5次，准备接种。

4、外植体接种：

将茎段放在无菌培养皿的无菌滤纸上，用无菌的手术刀和镊子，把茎段两端切掉少许，切后茎段长1.5cm，进行接种；

将诱导出来的不定芽切分成单个芽，再将单芽接种在增殖培养基中进行增殖培养。

5、培养基：

（1）诱导培养基：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.05mg/L，附蔗糖30g/L， 琼脂7.0g/L，pH5.8；

（2）增殖培养基：MS+NAA 0.05mg/L+6-BA 1.0mg/L或MS+NAA 0.05mg/L+6-BA0.5mg/L，附蔗糖30g/L，琼脂7.0g/L，pH5.8。

6、培养条件：培养温度24±1℃，湿度50－60%，光照时间16h/d，光照强度2000－3000lx，培养周期60天。

7、生长状况：