[发明专利]一种汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原的分离纯化方法及其应用

摘要

本发明公开一种汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原的分离纯化方法及其应用，属于生物工程技术领域，纯化方法包括：1）汉逊酵母细胞的搅拌破碎；2）将步骤1）中得到悬液阴离子交换层析；3）将步骤2）得到层析悬液稀释；4）步骤3)中悬液阳离子交换层析；5）经步骤4）中阳离子交换层析所得组分，浓缩；6）将步骤5）得到的浓缩液使用凝胶过滤柱进行凝胶过滤。采用本发明所述方法，可以将汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原高效的分离和纯化，适用于规模化生产HBsAg重组蛋白，同时能有效的用于生产乙肝疫苗。

主权项

一种分离纯化汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）取常规工艺发酵培养得到的汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原培养液，通过离心并洗涤用于表达乙肝表面抗原的汉逊酵母细胞，然后置于高压匀破碎直至细胞破碎率达到90%，向破碎液中加0.05～1.0%（v/v）的表面活性剂吐温20，调节pH值至8.5，2~8℃下搅拌4~16小时，得悬浮液；2）将步骤1）制备的悬液pH值调节至8.5后，离心除去细胞碎片，调整电导率小于5.0mS/cm，0.45μm或0.2μm微滤，然后进行阴离子交换层析，层析介质为DEAE Sepherose FF，收集含汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原活性的流穿；3）将步骤2）得到的悬液使用缓冲液稀释2~4倍，吐温20终浓度0.05~0.9%；4）将步骤3）得到的稀释液进行阳离子交换层析，所述的阳离子交换层析介质的配基为磺丙基或季铵盐，上样结束后，使用含有吐温20终浓度0.05~0.9%的缓冲液再平衡，收集含汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原活性的流穿；5）对经步骤4）中阳离子交换层析所得组分，采用截留分子量为100～500KD的超滤膜将样品一次或多次重复浓缩，直至样品中蛋白质浓度为1.0～2.0mg/ml；6）将步骤5）得到的浓缩液使用凝胶过滤柱进行凝胶过滤，去除部分乙肝表面抗原病毒样颗粒形成的聚集物，最后得到纯度大于99%以上的汉逊酵母表达的重组乙肝表面抗原。