[发明专利]一种应用发酵与泡沫分离耦合生产多粘菌素E的方法

摘要

本发明提供一种应用发酵与泡沫分离耦合生产多粘菌素E的方法。该方法提出将发酵、膜分离与泡沫分离耦合通过蠕动泵构成循环回流装置制备多粘菌素E。在耦合操作时，利用蠕动泵将发酵液通过膜过滤器进入泡沫分离塔，产物和液体通过膜而细胞被截留在发酵罐中继续发酵，保证了菌体的恒定；在泡沫分离塔底部装有气泡分布器，通过鼓气产生气泡进行泡沫分离，由于通过膜过滤器部分营养物质进入泡沫分离塔，所以本发明采用的是循环回流的方式将泡沫分离后的余液回流回发酵罐中，保证了营养物质的充分利用；同时本发明采用罐体外耦合，发酵的操作条件和泡沫分离的操作条件分别控制，都可以满足最佳的操作条件。

主权项

一种微生物发酵与泡沫分离技术耦合生产多粘菌素E的方法，其特征在于包括如下步骤：a)菌种活化：将从冷冻甘油管中得到的多粘芽孢杆菌菌液，接种于斜面培养基中进行活化，30℃，培养65～75h；b)种子培养：将活化后的菌种接种到含种子培养基的种子瓶中，在32℃培养24h，得到种子液，准备进入微生物发酵与泡沫分离技术耦合生产多粘菌素E的联合装置进行下一步骤；c)发酵培养：将上步得到的种子液以10％的接种量首先接种到装有发酵培养基的发酵罐中，培养温度30‑35℃、搅拌转速100‑400r/min、通气量100‑300mL/min，多粘芽孢杆菌在发酵培养基中发酵培养得到富含多粘菌素E的发酵液；培养基装液量为发酵罐容积的60～85％；d)微孔滤膜过滤：多粘芽孢杆菌在发酵罐中发酵培养，发酵30‑40h后，启动发酵罐内部的膜过滤器，发酵液中的产物分子和部分培养基通过膜过滤器，通过蠕动泵以100‑300mL/h的速度进入发酵罐外部的泡沫分离塔中，生物细胞被截留在发酵罐内继续发酵；e)泡沫分离：分离塔内的液体体积累积到塔体积的25～40％后，开启分离系统进行泡沫分离，其中，通气量为50‑150mL/min，温度为30‑35℃，顶部接收液体形成多粘菌素E的浓缩液，而后为保持分离塔的装液量不变，开启回流阀将富有营养物质的泡沫分离余液回流进入发酵罐中，循环进行，直至发酵结束。