[发明专利]一种促进产油微藻细胞和油脂快速积累的培养方法

摘要

本发明公开了一种促进产油微藻细胞和油脂快速积累的培养方法，首先在异养培养条件下，利用黄腐酸刺激细胞快速生长，当藻细胞生长到对数生长期后期，此时细胞浓度达到6.63g L^-1，离心弃去上清液，作为第二阶段所需的种子液。用纯水配成1000mg L^-1的黄腐酸母液，将其添加到kuh1培养基中使黄腐酸浓度为5、25、125、625mg L^-1。然后将上述所得种子液加入含有不同浓度黄腐酸的kuh1培养基中，使其初始浓度为2.3g L^-1。然后将上述藻液连续光照培养，每2天定期取样测量生物量和油脂含量。本发明方法简单可行，成本低廉，并大幅缩短了培养时间并且油脂含量有较显著地提高，对于微藻生物柴油生产的工业化具有重要意义。

主权项

一种促进产油微藻细胞和油脂快速积累的培养方法，包括以下步骤：步骤1、制备基于黄腐酸的异养和自养培养基，具体为：异养培养阶段，选择kuh1培养基作为单针藻的基本培养基，分装300ml进入500ml的三角瓶中，按10g L^‑1的量加入葡萄糖作为碳源，调整pH值为6.8～7.1，加入80mg L^‑1的黄腐酸，自养培养阶段，选择kuh1培养基作为单针藻的基本培养基，调整pH值为7.0，在500ml的三角瓶中装入200ml的培养基，加入0、5、25、125、625mg L^‑1的黄腐酸；步骤2、接入产油单针藻进行异养‑自养培养，具体为：高压高温灭菌20min，接入产油单针藻，异养培养阶段，藻细胞的初始浓度控制在10⁶个ml^‑1；自养培养阶段，接种量为2.3g L^‑1，后进行摇瓶培养，光照强度为3500lux，培养温度为25℃，摇床转速为150r min‑¹；步骤3、制备生物柴油，将终培养液离心富集，转速为9000r min^‑1，时间为6min。湿细胞在‑70℃下冷冻过夜，后进行抽真空冷冻干燥。添加干藻粉样品2倍质量的石英砂研磨20min后用氯仿‑甲醇(2:1，v/v)进行油脂提取，有机溶剂重复提取3次后收集有机相浓缩称重。上述提取油脂加2mL 3％硫酸‑甲醇进行甲酯化制备得到生物柴油。