[发明专利]一种促进产油微藻细胞和油脂快速积累的培养方法

权利要求书

1.一种促进产油微藻细胞和油脂快速积累的培养方法，包括 以下步骤：

步骤1、制备基于黄腐酸的异养和自养培养基，具体为：异养 培养阶段，选择kuh1培养基作为单针藻的基本培养基，分装300ml 进入500ml的三角瓶中，按10gL^-1的量加入葡萄糖作为碳源，调 整pH值为6.8～7.1，加入80mgL^-1的黄腐酸，自养培养阶段，选 择kuh1培养基作为单针藻的基本培养基，调整pH值为7.0，在 500ml的三角瓶中装入200ml的培养基，加入0、5、25、125、 625mgL^-1的黄腐酸；

步骤2、接入产油单针藻进行异养-自养培养，具体为：高压 高温灭菌20min，接入产油单针藻，异养培养阶段，藻细胞的初 始浓度控制在10⁶个ml^-1；自养培养阶段，接种量为2.3gL^-1，后 进行摇瓶培养，光照强度为3500lux，培养温度为25℃，摇床转 速为150rmin-¹；

步骤3、制备生物柴油，将终培养液离心富集，转速为9000r min^-1，时间为6min。湿细胞在-70℃下冷冻过夜，后进行抽真空 冷冻干燥。添加干藻粉样品2倍质量的石英砂研磨20min后用氯 仿-甲醇(2:1，v/v)进行油脂提取，有机溶剂重复提取3次后收集 有机相浓缩称重。上述提取油脂加2mL3％硫酸-甲醇进行甲酯化 制备得到生物柴油。