[发明专利]一种Legumain响应释放阿霉素缓释纳米制剂及制备方法与作为制备载体药物的应用

摘要

一种Legumain响应释放阿霉素缓释纳米制剂及制备方法与作为制备载体药物的应用，本发明利用肿瘤组织高表达Legumain的生物学特性，制备Legumain响应的纳米水凝胶，从而实现对肿瘤组织的双重靶向效应（主动靶向和被动靶向），减少阿霉素对正常组织的次生伤害，本发明以透明质酸作为阿霉素药物载体的基础材料，透明质酸广泛存在与生物体的正常组织中，相对其他外源材料，具有较高的生物相容性和安全性，肿瘤组织还高表达透明质酸受体，因此以透明质酸作为载体材料，还能进一步达到靶向的效果。

主权项

1.一种Legumain响应释放阿霉素缓释纳米制剂的制备方法，其特征在于，所述的方法包括以下步骤：（1）阿霉素的多肽衍生物合成：按以下用量比例，称取Dox•HCl 1mmol和Fmoc‑A‑A‑N(Trt)‑L‑OH(即PEP) 1mmol溶于50ml DMF中，加入2mmol DIPEA后，室温，避光条件下磁力搅拌15min，加入1.2mmol HATU溶液,溶于2mlDMF中，室温，避光条件下搅拌4h，然后将反应置于‑20℃冷冻条件下使反应停止，再置于MWCO=100‑500的透析袋内透析，产物冷冻干燥，加入20% 哌啶反应5min去除Fmoc保护基团形成DOX‑LN(Trt)AA –NH2（也即DOX‑PEP–NH2），然后调节PH值至7.0，并用MWCO=100‑500的透析袋内透析去除小分子副产物，冻干；（2）产物分离纯化：将步骤（1）产物用甲醇复溶，用Sephadex LH‑20柱层析的方法分离纯化，用甲醇做洗脱剂洗脱，收集组分，用硅胶板薄层色谱法观测分离纯化组分，所用的展开剂为比例是1:9的甲醇：乙酸乙酯，将相同组分合并，旋干之后加入少量超纯水溶解，并冷冻干燥得到纯的产物，进行结构解析；（3）透明质酸嫁接阿霉素多肽衍生物：取0.1molMES与0.3molNaCl于试剂瓶中，加入1L超纯水完全溶解，准备三个小烧杯，取200 ml的上步溶液于烧杯中，再分别取190mg 的透明质酸（HA）于三个烧杯中，磁力搅拌48 hr至完全溶解；（4）往烧杯中加入9.7 mg EDC和7.2 mg NHS反应15 min后，将24 mg Dox‑PEP‑NH2用DMF溶解后，加入到上述烧杯中，进行交联反应，得到产物；（5）将产物装入MWCO=14000的透析袋，超纯水透析，将透析袋中的产物取出预冻后，冷冻干燥得到HA‑PEP‑Dox，所述的HA‑PEP‑Dox的化学结构式如下：；（6）载药纳米水凝胶制备：取100mg HA‑PEP‑Dox溶于20ml超纯水中，加入0.1mol的HCl，磁力搅拌至HA‑PEP‑Dox完全溶解，再加入100mg ADH、120mg EDC、80ml液体石蜡和1ml司班80，用均质机均质乳化，乳化完成后避光静置反应24h，反应结束后离心，上清加入150ml异丙醇，剧烈搅拌后离心收集沉淀，沉淀加入90% 异丙醇洗涤两次离心收集沉淀，将沉淀合并后加水后置于‑20℃条件下预冻，冷冻干燥得到产物，再加入20 mL三氟乙酸、20 mL二氯甲烷、800 uL三异丙基硅烷反应1 h 去除三苯甲基氨基保护基团，旋蒸去除二氯甲烷，和三氟乙酸，加水复溶，将产物装入MWCO=14000的透析袋，超纯水透析得最终产物。