[发明专利]一种Legumain响应释放阿霉素缓释纳米制剂及制备方法与作为制备载体药物的应用

说明书

一种Legumain响应释放阿霉素缓释纳米制剂及制备方法与作为制备载体药物的应用，本发明利用肿瘤组织高表达Legumain的生物学特性，制备Legumain响应的纳米水凝胶，从而实现对肿瘤组织的双重靶向效应（主动靶向和被动靶向），减少阿霉素对正常组织的次生伤害，本发明以透明质酸作为阿霉素药物载体的基础材料，透明质酸广泛存在与生物体的正常组织中，相对其他外源材料，具有较高的生物相容性和安全性，肿瘤组织还高表达透明质酸受体，因此以透明质酸作为载体材料，还能进一步达到靶向的效果。

技术领域

本发明涉及基于透明质酸的环境因子响应型纳米水凝胶药物缓释体系领域，具体涉及一种Legumain响应释放阿霉素缓释纳米制剂及其制备方法与作为制备抗肿瘤药物缓释载体药物的应用。

背景技术

阿霉素是一种常用的广谱抗肿瘤化学药物，然而，阿霉素作为一种强细胞毒性药物，对正常组织（如心脏、肝、肾以及肿瘤周围正常组织等）带来不可逆转的伤害。如何实现药物靶向肿瘤组织，减少对正常组织的次生伤害，是恶性肿瘤药物治疗中的一大难点。由于恶性肿瘤组织具有“渗透和滞留增强效应”，纳米尺度下的药物-载体体系能够透过肿瘤组织的新生血管壁而不能透过正常组织的血管壁，达到“被动靶向”肿瘤组织效果，增强药物在肿瘤组织的聚集，从而减少对正常组织的伤害。然而，大量的研究表明这种仅仅依靠“被动靶向”效应，在实践中往往很难达到实际需要的靶向效率。利用肿瘤组织自身及其微环境的生物学特性（如低PH值，高还原势，过表达叶酸受体等），制备环境因子响应型纳米药物载体，达到对肿瘤组织“主动”和“被动”双重或多重靶向效应，能够极大提高药物在肿瘤组织中的聚集，从而提高药物治疗的效果。Legumain是哺乳动物中唯一的特异性水解天冬酰胺残基的酶，研究表明Legumain在许多恶性肿瘤及肿瘤相关细胞中高表达，可作为恶性肿瘤药物靶向设计的新靶点。以往利用肿瘤组织高表达Legumain蛋白酶特性的药物缓释体系包括将药物与Legumain底物肽段直接相连，并在肽段另一端连接细胞膜不透性因子，从而使药物只能Legumain高活性的肿瘤组织中才能透过细胞（如PCT）。但这种设计的产物仍然是小分子药物，不具有纳米尺度下药物-载体体系的被动靶向效应，也没有在机体中长时间缓释的效果。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种Legumain响应释放阿霉素缓释纳米制剂及其制备方法与作为制备抗肿瘤药物缓释载体药物的应用，本发明利用肿瘤组织高表达Legumain的生物学特性，制备Legumain响应的纳米水凝胶，从而实现对肿瘤组织的双重靶向效应（主动靶向和被动靶向），减少阿霉素对正常组织的次生伤害。

本发明采用的技术解决方案是：一种Legumain响应释放阿霉素缓释纳米制剂，其化学结构式如下：

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一种所述的Legumain响应释放阿霉素缓释纳米制剂的制备方法，所述的方法包括以下步骤：

（1）阿霉素的多肽衍生物合成：按以下用量比例，称取Dox· HCl 1mmol和Fmoc-A-A-N(Trt)-L-OH(即PEP) 1mmol溶于50ml DMF中，加入2mmol DIPEA后，室温，避光条件下磁力搅拌15min，加入1.2mmol HATU溶液,溶于2mlDMF中，室温，避光条件下搅拌4h，然后将反应置于-20℃冷冻条件下使反应停止，再置于MWCO=100-500的透析袋内透析，产物冷冻干燥，加入20% 哌啶反应5min去除Fmoc保护基团形成DOX-LN(Trt)AA –NH2（也即DOX-PEP–NH2），然后调节PH值至7.0，并用MWCO（截留分子量）=100-500的透析袋内透析去除小分子副产物，冻干；

（2）产物分离纯化：将步骤（1）产物用甲醇复溶，用Sephadex LH-20柱层析的方法分离纯化，用甲醇做洗脱剂洗脱，收集组分，用硅胶板薄层色谱发观测分离纯化组分，所用的展开剂为比例是1:9的甲醇：乙酸乙酯，将相同组分合并，旋干之后加入少量超纯水溶解，并冷冻干燥得到纯的产物，进行结构解析；