[发明专利]基于网络型核酸纳米探针的酶循环放大检测DNA的比色法

摘要

本发明提供了基于网络型核酸纳米探针的酶循环放大检测DNA的比色法。采用适体自组装网络型核酸纳米探针和酶循环放大技术，以达到对靶DNA的痕量检测。其设计原理为：将三叉DNA1和三叉DNA2的末端分别设计为能够特异性识别凝血酶的适体序列1和适体序列2，使两种三叉DNA通过与凝血酶的特异性识别互相连接，形成网络型结构。其中，适体序列1和适体序列2又为富G序列，能与氯化血红素结合形成大量过氧化物模拟酶，催化反应底物产生放大的检测信号。通过本方法，可实现对靶DNA的超高灵敏检测，无需复杂仪器设备,简单易行。

主权项

1.基于网络型核酸纳米探针的酶循环放大检测DNA的比色法，其特征在于，设计与靶DNA特异性结合后，能与探针DNA互补配对的捕获探针；向固定后的捕获探针中依次加入靶DNA、探针DNA、DNA聚合酶、DNA内切酶，引发复制‑剪切反应，使靶DNA进行循环放大，实现扩增；向上述体系中继续加入凝血酶、氯化血红素，探针DNA与凝血酶特异性识别，进而与氯化血红素结合，形成过氧化物模拟酶；再向上述体系中加入能够通过凝血酶相互连接形成网络型结构的三叉DNA；所述三叉DNA分为两类，分别为三叉DNA1和三叉DNA2，所述三叉DNA1的末端为能够特异性识别凝血酶识别位点1的适体序列1，所述三叉DNA2的末端为能够特异性识别凝血酶识别位点2的适体序列2；网络型结构中的凝血酶适体序列与氯化血红素结合，形成大量过氧化物模拟酶；向上述产物中加入相应的底物，采用比色法对靶DNA进行检测；所述凝血酶含有两个识别位点，分别为凝血酶识别位点1和凝血酶识别位点2；所述三叉DNA末端的适体序列1和适体序列2皆含有富G序列；所述探针DNA一端为能够特异性识别“凝血酶识别位点1或2”的适配体序列；所述捕获探针为茎环结构，与靶DNA特异性结合后，茎环结构被打开，被打开的茎环末端可与探针DNA互补配对；所述适体序列1为5'‑GGTTGGTGTGGTTGG‑3'；所述适体序列2为5'‑AGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACT‑3'；所述捕获探针的序列为：5'‑CCGCCGTTGAACACCATTGTCACACCCTCAGCAACGGCGG‑3'；所述靶DNA序列为：5'‑TGGAGTGTGACAATGGTGTTTG‑3'；所述三叉DNA1的序列为：1)5'‑GGTTGGTGTGGTTGGTGGATCCGCATGACATTCGCCGTAAGGTC‑3'；2)5'‑GGTTGGTGTGGTTGGCTTACGGCGAATGACCGAATCAGCCTGTC‑3'；3)5'‑GGTTGGTGTGGTTGGAGGCTGATTCGGTTCATGCGGATCCAGTC‑3'；三叉DNA2的序列为：1)5'‑AGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACTTGGATCCGCATGACATTCGCCGTAAGGTC‑3'；2)5'‑AGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACTCTTACGGCGAATGACCGAATCAGCCTGTC‑3'；3)5'‑AGTCCGTGGTAGGGCAGGTTGGGGTGACTAGGCTGATTCGGTTCATGCGGATCCAGTC‑3'；所述探针DNA序列：5'‑GGTTGGTGTGGTTGGGCCGTTGC‑3'；所述DNA内切酶：Nb.BbvCI核酸内切酶。