[发明专利]一种快速提取马铃薯晚疫病菌单个孢子囊DNA的方法

摘要

本发明提供一种快速提取马铃薯晚疫病菌单个孢子囊DNA的方法。利用毛细玻璃管的毛细现象获取单孢子囊后，利用改进的CTAB法直接提取单个孢子囊的DNA。单个孢子囊所含有的蛋白及多糖等杂质较少，因此无需利用酚‑氯仿‑异戊醇去除，进而大大减少了DNA在繁琐操作过程中的丢失。可在较短时间内高效提取晚疫病菌的纯DNA。

主权项

1.一种快速提取马铃薯晚疫病菌单个孢子囊DNA的方法，其特征在于：具体方法如下：1） 单个孢子囊的分离a.在发病叶片病斑边缘用无菌接种针挑取直径4 mm的马铃薯晚疫病菌菌丝团于25 mL离心管中，加入5‑10 mL无菌水充分混匀后，用灭菌的脱脂棉进行过滤，收集孢子囊悬浮液于2 ml离心管中，并立即进行下一步骤；b.将孢子囊悬浮液浓度调至1个/2 µL，利用直径6 mm的毛细玻璃管自吸6‑8 s，吸取2µL悬浮液，在显微镜下观察，确认毛细管中含有一个孢子囊后转移至0.5mL离心管中，在4℃冰箱中放置2 h，使孢子囊中游动孢子充分释放；2）单个孢子囊DNA的提取a.将CTAB于水浴锅中60℃水浴10 min；b.取10 µL 预热的CTAB液于含有单个孢子囊的0.5 mL离心管中，轻轻振荡，混匀后放置于60℃水浴锅中，水浴15 min；c.水浴后，加10 µL异丙醇于离心管中，轻摇混匀后冰浴15min； d.12000 rpm离心10 min后，弃上清，并把离心管小心倒扣在无菌吸水纸上2 min，去除管内液体；e.70%酒精洗涤沉淀，12000 rpm离心3 min，弃上清，通风橱中放置5 min风干沉淀，加20 µL TE液，溶解，备用。