[发明专利]甲基营养酵母菌巴斯德毕赤酵母中的体内非天然氨基酸表达

摘要

本发明提供在甲基营养酵母菌，例如巴斯德毕赤酵母中产生含非天然氨基酸的多肽的正交翻译系统。还提供了在甲基营养酵母菌，例如巴斯德毕赤酵母中产生含非天然氨基酸的多肽的方法。

主权项

一种甲基营养酵母细胞，其包含：a)非天然氨基酸；b)正交氨酰‑tRNA合成酶(O‑RS)，其中所述O‑RS在甲基营养酵母细胞中优先用非天然氨基酸氨酰化正交tRNA(O‑tRNA)，并且，所述O‑RS由整合入基因组的核酸在FLD1启动子的转录调控下表达，该核酸包含编码所述O‑RS的多核苷酸；和c)正交tRNA(O‑tRNA)，其中所述O‑tRNA在甲基营养酵母细胞中识别选择者密码子并优先被所述O‑RS用非天然氨基酸氨酰化，并且，所述O‑tRNA由整合入基因组的核酸表达，所述O‑RS和所述O‑tRNA由同一质粒上的表达盒编码且稳定整合到细胞基因组的ARG4基因，该核酸包含编码或包含所述O‑tRNA的多核苷酸；并且所述O‑RS和O‑tRNA衍生自大肠杆菌。