[发明专利]一种高纯度胰激肽原酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种高纯度胰激肽原酶的制备方法，属于胰激肽原酶提取制备技术领域。本发明利用茶籽提取液和腐殖质污泥混合、经过滤得过滤液，放入茶籽麸中蒸煮、挤压制成茶籽麸饼，随后收集猪胰腺和口水，待混合后程序升温，并依次与茶籽麸饼进行混合，混合过程中逐渐加量，并使用不同浓度的去离子水和氯化钠分别进行三次淋洗，随后收集淋洗液，通过氢氧化钠调节pH值后，加入乙醇过滤，最终将得到的滤液进行抽滤，干燥，从而得到高纯度胰激肽原酶的制备方法。实例证明，本发明操作简单，工艺水平高，不仅使得比活达到了850单位/mg蛋白以上，而且纯度达到了92％以上，达到了国家指标，适合大规模应用。

主权项

一种高纯度胰激肽原酶的制备方法，其特征在于具体操作步骤为：（1）取7～10cm厚的农村河道淤泥7～8kg，放置在干燥机中，在65～70℃下干燥处理，当河道淤泥中含水量为10～15％时，停止干燥，取出放入容器中，置于阴凉处自行冷却至室温，并使其上下分层，之后用刮刀轻轻刮去上层4～8cm后的河道淤泥，得下层河道腐殖质污泥；（2）取500～600g干燥无霉菌的茶籽，放入清水中反复清洗，去除表面残留污物后，平铺在铺有纱布的钢筛中，置于干燥机中，在温度为100～105℃下干燥处理15～25min，使得茶籽含水量为3～5％，再将干燥后的茶籽放入烧杯中，加入800～1000mL质量浓度为75％的乙醇溶液，混合均匀，置于超声振荡仪中，设置超声振荡频率为20～25KHz，超声功率为100～150W，超声振荡反应1～3h，过滤，得滤液；（3）将上述得到的滤液放入索式抽提器中，抽提50～55min，得滤液抽提液，再将得打的滤液抽提液放入蒸馏装置中，在55～65℃下水浴加热35～40min，去除乙醇，得到茶油提取物；（4）将上述得茶油提取物放入容器中，向其中加入上述步骤（1）得到的河道腐殖质污泥，以500～600r/min的转速搅拌20～30min，使其完全混合均匀，得混合物，随后将得到是混合物放入高速离心机中，在1200～1500r/min的转速下离心处理40～45min，去渣，得上清液；（5）再取500～600g干燥无霉菌的茶籽，放入清水中反复清洗，去除表面残留污物后，平铺在铺有纱布的钢筛中，放置于太阳光下翻晒，其中每隔2h翻晒一次，直至茶籽含水量为8～12％为止，随后将翻晒后的茶籽放入锅中，在45～55℃下翻炒30～60min，待翻炒完毕，将炒后的茶籽送入螺旋挤出机中进行挤压、排油，得茶籽麸；（6）将上述步骤（4）得到的上清液加入到上述得到的茶籽麸中，以300～450r/min的速度搅拌10～15min，使其完全混合，随后将混合后的物质放入蒸锅中，在90～100℃下蒸煮30～35min，待蒸煮结束，自行冷却至室温，并移入挤压机中挤压成直径为10～15cm的圆形茶籽麸饼；（7）取400～800g新鲜冷冻猪胰腺洗净，用清水反复搓洗后，置于打浆机中，打浆3～5min，得猪胰腺浆，随后将得到的猪胰腺浆置于烧杯中，并向烧杯中加入猪胰腺浆质量60～65％的人体唾液，用搅拌棒充分混合均匀，在搅拌过程中，以5～6℃/min的速率程序升温至58～65℃时，停止搅拌，得混合物；（8）将上述混合物进行过滤，得滤液，随后取5～30％的滤液放入容器中，向其中加入55～65g上述步骤（6）得到的圆形茶籽麸饼，搅拌浸泡15～18min后取出，用去离子对其进行淋洗，使得pH值为6～8，收集淋洗液1，再取30～40％的滤液放入烧杯中，向其中加入62～75g上述步骤（6）得到的圆形茶籽麸饼，搅拌浸泡20～25min后取出，用质量浓度为0.5mol/L的氯化钠溶液淋洗3～4h，收集淋洗液2，再取30～60％的滤液放入反应釜中，向其中加入100～120g上述步骤（6）得到的圆形茶籽麸饼，搅拌浸泡25～30min后取出，用质量浓度为1mol/L的氯化钠溶液淋洗1～2h，收集淋洗液3；（9）将上述得到的淋洗液1、淋洗液2、淋洗液3置于容器中，充分混合均匀，向容器中加入20～35mL质量浓度为30％的氢氧化钠溶液，调节pH值为9～10后，静置4～6h，待静置结束，再在其中加入淋洗液总体积1～2倍质量浓度为98％的乙醇溶液，搅拌均匀后，沉淀20～22h，之后收集沉淀物放入布式漏斗中，对其抽滤，收集滤渣；（10）将上述收集得到的滤渣放入干燥机中，在温度100～110℃下干燥处理30～45min，即可得到一种高纯度胰激肽原酶。