[发明专利]一种大花序桉的组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种大花序桉的组培快繁方法，该方法采用大花序桉优良家系的优良单株，伐倒后促生萌芽，利用萌芽作为外殖体，以带有潜伏芽的茎段离体诱导无菌芽，无菌芽的获得，不经过愈伤组织成苗途径，而是直接由外植体茎段萌生侧芽或不定芽，经过对无菌芽进行继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽，获得再生植株。本发明的大花序桉组培快繁方法，操作难度较低、无菌芽繁殖体系生长稳定，重复性良好，可反复多代规模扩繁，剪切芽苗生根培养后，生根率较高，已具备推广价值，生根小苗移植后能成活，苗木生长正常，获得的再生植株大田种植后能健壮生长，造林成活率95%以上,并能保持优树的优良遗传性状。

主权项

一种大花序桉的组培快繁方法，其特征在于：采用大花序桉优良家系的优良单株，对其进行伐桩萌芽，利用萌芽作为外殖体，通过带芽茎段离体诱导无菌芽，经过对无菌芽的继代增殖培养、生根培养和生根苗移栽，获得再生植株；该方法的具体步骤如下：（1）在澳大利亚引种的家系试验林中，经测试对比，选择出适合本地生长的大花序桉优良家系；（2）在大花序桉优良家系中，通过测量胸径、树高、蓄积、连年生长量、木材材性以及干形指标，综合对比后选择出优良单株；（3）将优良单株在离地面15‑20cm高度处伐倒，促萌芽，当萌芽条长到12‑18cm时，剪取萌芽条，用水浸泡基部带回实验室备用；（4）萌芽条修剪去叶片、叶柄，用自来水流水冲洗3‑5min,再用饱和洗衣粉溶液洗涤10min，用纯净水清洗干净；（5）在超净工作台上，将萌芽条剪去嫩梢段和基部老化部分，留半木质化茎段，切成长2‑3cm，保留有1‑2个潜伏芽的切段做消毒材料；（6）将待消毒材料置于高压灭菌处理过的无菌瓶中，用75%酒精溶液浸泡15‑17s，无菌水清洗3‑5次，洗去残留酒精，再用0.1%HgCL2溶液浸泡并适当搅拌，7‑9min后倒去HgCL2溶液至专用收集罐中，用无菌水清洗材料5‑6次；（7）用镊子夹取清洗好的茎段，放置在灭菌的接种碟上，用灭菌过的滤纸吸干表面水分，切去叶柄和茎段的两端，接种到无菌芽诱导培养基上，全暗培养8‑12天后，在温度26±2℃，光照12h/d,光照强度1500‑2000lux条件下培养15‑25天； （8）外殖体萌芽后，侧芽和不定芽不断生长，萌芽15‑20天后，选取没有污染的无菌芽，切割后转入继代增殖培养基上，在温度26±2℃，光照强度2000‑2500lux条件下，培养18‑23天，以促进丛芽增殖和生长，在增殖培养基上反复继代培养，无菌芽苗数量不断增多；（9）当继代培养的芽苗长到2‑3cm，并有3‑4对叶片时，切取芽苗转入生根培养基上培养，温度28‑30℃，光照强度1200‑1500lux，培养6‑10天，当切口冒出短根或根点，出根率达到30‑40%时，移瓶至温度28‑35℃，光照强度3000‑5000lux的自然光下培养15‑20天；（10）生根齐全，苗高3‑4cm的生根瓶苗，洗去琼脂，移栽至用KMnO4消毒过的黄心土和蛭石做基质的营养杯或轻基质育苗杯上，黄心土和蛭石的比例为5：1，培养60‑80天，得到再生植株；(11)将具有发育不完全根，苗高1.5‑2.0cm的生根瓶苗，洗去琼脂，移栽到用KMnO4消毒过的黄心土+蛭石+河沙按照4:1:1做基质的营养杯，移栽前用ABT1生根粉100‑500ppm水溶液浸泡10‑30min，移栽后特殊培养25‑30天，将长出真根的苗和未长出真根的苗分开管理，再培养60‑80天后，得到再生植株；所述步骤（7）中的无菌芽诱导培养基为：改良MS+N6苄基腺嘌呤（6‑BA)1.0mg/L+萘乙酸0.2‑0.4mg/L+维生素C 2.0 mg/L+核黄素7.0 mg/L+蔗糖30g/L+琼脂3.75g/L，pH 5.8‑6.0；所述步骤（8）中的继代增殖 培养基为：改良MS+N6苄基腺嘌呤（6‑BA)0.3‑0.5mg/L+萘乙酸0.1‑0.15mg/L+核黄素7.0 mg/L+维生素C 2.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂3.75g/L，pH 5.8‑6.0；所述步骤（9）中的生根培养基为：1/2改良MS+ABT10.6mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖15g/L+琼脂3.9g/L，pH 5.8‑6.2。