[发明专利]一种新型的活细胞中microRNA分子的检测方法

摘要

一种新型的活细胞中microRNA分子的检测方法，其特征是利用细胞内特异表达的靶标microRNA分子作为催化剂，催化金纳米粒子‑量子点组装体的去组装反应，重复利用单个microRNA分子将多个QD与GNP进行解离，使预先被猝灭的QD荧光信号恢复并被多级放大，从而实现对活细胞内靶标microRNA分子的高灵敏度检测与成像，并以此作为区分肿瘤细胞和正常细胞的依据。

主权项

1.一种新型的活细胞中microRNA分子的检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：第一步，通过DNA3将修饰有DNA1的GNP和修饰有DNA2的QD通过DNA碱基互补配对规则进行程序化地组装，获得GNP‑QD纳米组装体，所述DNA1和DNA2均能够与DNA3进行碱基互补配对，所述DNA1含有至少一个巯基，所述DNA2含有磷硫键；在组装体中，由于QD与GNP之间的高效荧光共振能量转移效应，QD本身的荧光性能被暂时淬灭；其中，所述GNP的粒径范围为5 nm～100 nm；所述QD的发射波长范围从450 nm～750 nm；第二步，用脂质体将所述GNP‑QD纳米组装体和DNA4一起转染到活细胞中共培养，DNA4能够与DNA3进行碱基互补配对；之后，在活细胞中表达的靶标microRNA分子的催化作用下，所述GNP‑QD纳米组装体发生催化去组装，使GNP与QD相分离，此时由于QD与GNP之间的荧光共振能量转移效应消失，QD本身的荧光信号获得恢复，细胞能够发出荧光；所述靶标microRNA分子为活细胞中任意高表达的microRNA分子；第三步，通过细胞的荧光成像，实现对靶标microRNA分子的特异性和高灵敏的定性检测。