[发明专利]用于快速检测苯并(a)芘的纳米免疫传感器的制备方法及其检测方法

摘要

本发明属于食品安全快速检测技术领域，具体涉及用于快速检测苯并(a)芘的纳米免疫传感器的制备方法及其检测方法，包括：以玻碳电极为基础电极，采用聚酰胺‑胺树枝状大分子结合聚二烯丙基二甲基氯化铵功能化的石墨烯修饰玻碳电极，然后滴涂纳米金溶液，纳米金经静电吸附作用固定于修饰电极上，再经戊二醛偶联固定多环芳烃抗体制备成纳米免疫传感器；将该纳米免疫传感器用于食品中苯并(a)芘的检测，其结果与国标方法结果一致，但该方法灵敏度高、精确度高、检测时间短，是一种简便快速、精确度较高的苯并(a)芘的检测方法，具有广阔的应用前景。

主权项

1.一种用于快速检测苯并(a)芘的纳米免疫传感器的制备方法，以玻碳电极为基础电极，采用聚酰胺-胺树枝状大分子结合聚二烯丙基二甲基氯化铵功能化的石墨烯修饰玻碳电极，然后滴涂纳米金溶液，纳米金经静电吸附作用固定于修饰电极上，再经戊二醛偶联固定多环芳烃抗体制备成纳米免疫传感器；其特征是包括以下步骤:a.电极预处理将玻碳电极用粒径为0.05μm的氧化铝抛光粉抛光打磨至电极表面呈镜面，然后用蒸馏水冲洗干净，再依次置于体积分数为50％的硝酸、丙酮、去离子水中超声清洗2min～6min，氮气吹干，备用；b.聚酰胺-胺-PDDA功能化石墨烯复合物的制备准确称取0.2g石墨烯加入到10mL体积分数为0.25％的聚二烯丙基二甲基氯化铵(PDDA)水溶液中，超声处理25min～35min，水洗三次去除过量的石墨烯，制得PDDA功能化的石墨烯，取0.01g PDDA功能化的石墨烯加入到10mL N,N-二甲基甲酰胺中，使其浓度为1mg/mL，超声处理10min～20min，得到均匀一致的PDDA功能化石墨烯的N,N-二甲基甲酰胺悬浮液，备用；准确称取0.02g聚酰胺-胺溶于10mL甲醇中，使其浓度为2mg/mL，超声处理15min～25min，得到均匀透明的聚酰胺-胺的甲醇溶液，然后将聚酰胺-胺的甲醇溶液与PDDA功能化石墨烯的N,N-二甲基甲酰胺悬浮液按1:1混合均匀，超声处理30min～40min，制得聚酰胺-胺-PDDA功能化石墨烯复合物；c.纳米金的制备准确量取50mL 0.1mg/mL的氯金酸溶液置于烧杯中，用玻璃棒搅拌下加热至沸腾，迅速加入2.5mL质量分数为1％的柠檬酸钠溶液，持续搅拌至溶液颜色变为酒红色，得到纳米金溶液；d.纳米免疫传感器的制备将步骤a中得到的玻碳电极应用三电极系统，即以玻碳电极为工作电极、Ag/AgCl电极为参比电极、铂丝电极为辅助电极，在-0.2V～+0.6V的电位区间，采用LK98BⅡ型微机电化学分析系统以50mV·s-1的扫描速度在新配制的0.05mol/L硫酸溶液中进行循环伏安扫描10圈，对玻碳电极表面进行活化处理；冲洗玻碳电极后，用移液枪移取3～6μL步骤b得到的聚酰胺-胺-PDDA功能化石墨烯复合物滴涂到玻碳电极表面，于室温晾干，再移取2～5μL纳米金溶液滴涂到修饰的电极表面，于室温晾干，然后在修饰电极表面滴涂3～5μL质量分数为0.5％的戊二醛溶液活化修饰的电极表面，于4℃条件下活化25～35min，然后用pH为7.4的0.2mol/L磷酸盐缓冲液冲洗电极，再滴涂3～6μL多环芳烃抗体，并于4℃条件下固定2h，再滴涂3～5μL质量分数为2％牛血清白蛋白溶液于4℃下封闭1h，用pH为7.4的0.2mol/L磷酸盐缓冲液反复冲洗干净，得到苯并(a)芘纳米免疫传感器，于4℃条件下保存备用。