[发明专利]用于快速检测苯并(a)芘的纳米免疫传感器的制备方法及其检测方法

说明书

本发明属于食品安全快速检测技术领域，具体涉及用于快速检测苯并(a)芘的纳米免疫传感器的制备方法及其检测方法，包括：以玻碳电极为基础电极，采用聚酰胺‑胺树枝状大分子结合聚二烯丙基二甲基氯化铵功能化的石墨烯修饰玻碳电极，然后滴涂纳米金溶液，纳米金经静电吸附作用固定于修饰电极上，再经戊二醛偶联固定多环芳烃抗体制备成纳米免疫传感器；将该纳米免疫传感器用于食品中苯并(a)芘的检测，其结果与国标方法结果一致，但该方法灵敏度高、精确度高、检测时间短，是一种简便快速、精确度较高的苯并(a)芘的检测方法，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种用于快速检测苯并(a)芘的纳米免疫传感器的制备方法，以及利用该制备方法所制备的纳米免疫传感器检测肉制品中的苯并(a)芘的检测方法。

背景技术

苯并(a)芘是一种由4个苯环构成的多环芳烃，常温下为无色至淡黄色针状晶体，性质稳定。在煎烤、烧烤、油炸动物性肉制品的过程中，食品会产生苯并(a)芘，人和动物摄入苯并(a)芘超出限量的肉制品后会导致肿瘤和癌变，对健康造成潜在的威胁。目前，由食品污染引起的疾病是引起人们广泛关注的食品安全问题之一，许多国家已将苯并(a)芘为食品有害物质监测的重要内容之一，如德国限定肉制品中苯并(a)芘的残留量为1μg/kg，我国国标限定肉制品中苯并(a)芘的残留量应在5μg/kg以下。已报道的苯并(a)芘检测方法有液相色谱法、气相-质谱联用法、薄层层析法等，但色谱法、层析法等检测方法存在操作繁琐、耗时长、结果分辨性差等缺点。因此，目前许多工作研究者致力于开发更为快速、准确的苯并(a)芘检测方法，以提高食品中苯并(a)芘的检测效率，同时要避免出现假阴性或假阳性的现象。

发明内容

本发明为解决上述技术的不足，提供一种用于快速检测苯并(a)芘的纳米免疫传感器的制备方法，还提供一种利用该制备方法所制备的纳米免疫传感器检测食品中苯并(a)芘的方法，本发明既具备更加灵敏、快速、易微型化、便于携带和现场检测的优势，同时也具备免疫反应抗原-抗体结合的特异性。

为解决以上问题，本发明采用以下技术方案：

本发明一种用于快速检测苯并(a)芘的纳米免疫传感器的制备方法，其特征是，以玻碳电极为基础电极，采用聚酰胺-胺树枝状大分子结合聚二烯丙基二甲基氯化铵功能化的石墨烯修饰玻碳电极，然后滴涂纳米金溶液，纳米金经静电吸附作用固定于修饰电极上，再经戊二醛偶联固定多环芳烃抗体制备成纳米免疫传感器。

所述的用于快速检测苯并(a)芘的纳米免疫传感器的制备方法，包括以下步骤:

a.电极预处理

将玻碳电极用粒径为0.05μm的氧化铝抛光粉抛光打磨至电极表面呈镜面，然后用蒸馏水冲洗干净，再依次置于体积分数为50％的硝酸、丙酮、去离子水中超声清洗2min～6min，氮气吹干，备用；

b.聚酰胺-胺-PDDA功能化石墨烯复合物的制备

准确称取0.2g石墨烯加入到10mL体积分数为0.25％的聚二烯丙基二甲基氯化铵(PDDA)水溶液中，超声处理25min～35min，水洗三次去除过量的石墨烯，制得PDDA功能化的石墨烯，取0.01g PDDA功能化的石墨烯加入到10mL N,N-二甲基甲酰胺中，使其浓度为1mg/mL，超声处理10min～20min，得到均匀一致的PDDA功能化石墨烯的N,N-二甲基甲酰胺悬浮液，备用；

准确称取0.02g聚酰胺-胺溶于10mL甲醇中，使其浓度为2mg/mL，超声处理15min～25min，得到均匀透明的聚酰胺-胺的甲醇溶液，然后将聚酰胺-胺的甲醇溶液与PDDA功能化石墨烯的N,N-二甲基甲酰胺悬浮液按1:1混合均匀，超声处理30min～40min，制得聚酰胺-胺-PDDA功能化石墨烯复合物；

c.纳米金的制备