[发明专利]一种快速测定面团中游离巯基和二硫键含量的方法

摘要

本发明提供了一种利用标准曲线法快速测定面团中游离巯基和二硫键含量的方法，包括以下步骤：(1)用缓冲溶液配制不同浓度的L-半胱氨酸标准溶液，添加显色剂显色后用分光光度计测定其在412nm处的吸光度，并绘制其吸光度与L-半胱氨酸浓度的标准曲线；(2)先将面团用缓冲溶液溶解后取上清液，再加入显色剂显色后用分光光度计测定其吸光度，再依据第一步中所得的标准曲线计算得到面团中游离巯基的含量；(3)面团溶液用巯基乙醇还原二硫键，通过三氯乙酸沉淀，再用缓冲溶液复溶，测定总巯基含量，通过计算得到面团中二硫键含量。本发明具有测量快速方便、精密度、准确度高，重现性好、设备比较简单、实用性强等特点。

主权项

一种快速测定面团中游离巯基和二硫键含量的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：a、绘制L‑半胱氨酸标准曲线：用0.2M Tris‑Gly缓冲溶液将L‑半胱氨酸配制成不同浓度的标准溶液，测定不同浓度的L‑半胱氨酸在412nm处的吸光度，以吸光度值为横坐标，对应的L‑半胱氨酸标准溶液浓度为纵坐标，绘制L‑半胱氨酸标准曲线。b、测定面团中游离巯基含量：取新鲜小麦粉面团，研磨后溶解于0.2M Tris‑Gly缓冲溶液中，离心得到上清液；上清液显色后于波长412nm处测定吸光度；通过L‑半胱氨酸工作曲线计算得到面团中游离巯基的含量。c、测定面团中二硫键含量：取步骤b中上清液，加入β‑巯基乙醇和缓冲液溶液，然后加入12％三氯乙酸溶液，离心得到蛋白质沉淀；用12％三氯乙酸洗沉淀两次，然后将沉淀物溶于缓冲溶液中，混和均匀显色后测定吸光度；以L‑半胱氨酸标准曲线校准，得到总巯基的含量。通过L‑半胱氨酸工作曲线计算得到面团中总巯基和二硫键含量。